GM-1-PLGA微球的制備及其體外釋藥評價.pdf

1、目的：GM-1即單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂，是最重要的神經(jīng)節(jié)苷脂之一，可促使體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞生長、分化、再生，對神經(jīng)生長因子有調(diào)節(jié)作用，能夠促進(jìn)神經(jīng)元軸突和樹突增生，側(cè)突形成，抑制細(xì)胞變性，加強神經(jīng)營養(yǎng)，減少受損胞體的死亡，促進(jìn)神經(jīng)元的再生和機(jī)能恢復(fù)。其注射液已上市，主要用于治療血管性或外傷性中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變包括腦創(chuàng)傷、脊髓創(chuàng)傷、腦卒中、缺氧缺血性腦病、早產(chǎn)兒腦白質(zhì)損傷、帕金森病等。
　　 目前臨床上主要經(jīng)肌肉注射或靜脈滴注，長

2、時間大劑量給藥治療中樞系統(tǒng)疾病。但普通的GM-1制劑需反復(fù)多次給藥才能維持腦脊液內(nèi)的有效濃度，患者順應(yīng)性較差。
　　 近年來以聚合物為材料通過乳化包囊等分散技術(shù)將藥物制備成脂質(zhì)體、微乳、微球、納米囊、納米粒等微粒分散體系，用作藥物緩、控釋的研究日益增多。該類制劑數(shù)日甚至數(shù)月注射一次，可顯著減少用藥次數(shù)，增強藥物的安全性和有效性，提高患者的依從性。其中生物可降解型長效微球注射劑順應(yīng)了制劑向長效、高效、低毒的發(fā)展方向，是近30年來藥

3、劑學(xué)研究的一個熱點。
　　 乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)是由羥乙酸和乳酸聚合而成，是一種新型合成的生物可降解高分子材料。PLGA在體內(nèi)通過水解反應(yīng)緩慢降解，最終產(chǎn)物是二氧化碳和水，中間產(chǎn)物乳酸、羥基乙酸也是體內(nèi)正常的代謝產(chǎn)物。PLGA無毒、無刺激性，具有良好的生物相容性。在美國，F(xiàn)DA已批準(zhǔn)PLGA作為載體材料上市，而國內(nèi)正在申報中。隨著國內(nèi)藥用PLGA的上市，其成本將大大降低，通過現(xiàn)代制劑技術(shù)，以PLGA為載體材料，將GM

4、-1制成緩釋微球劑，肌肉注射給藥，緩慢釋放藥物，從而減少給藥次數(shù)，減輕患者痛苦，增加患者用藥的順應(yīng)性，具有非常好的市場前景和社會意義。
　　 方法：采用W/O/W型乳化溶劑揮發(fā)法制備GM-1-PLGA微球。在單因素考察的基礎(chǔ)上，以包封率和粒徑為評價指標(biāo)，采用正交試驗設(shè)計優(yōu)化最佳處方和制備工藝；光學(xué)顯微鏡觀察微球的外觀形態(tài)，算術(shù)均數(shù)法測定微球的粒徑和粒度分布；超速離心法分離微球與游離藥物，高效液相法測定微球的包封率和載藥量；采用動

5、態(tài)膜透析法，考察GM-1-PLGA在含1％吐溫-80、0.05％疊氮鈉的PBS(pH7.4)中的體外釋藥性，數(shù)學(xué)模型擬合GM-1-PLGA微球體外釋藥動力學(xué)，分析體外釋藥機(jī)理；通過加速試驗考察GM-1-PLGA微球的初步穩(wěn)定性。
　　 建立體外GM-1濃度的HPLC測定方法，確定HPLC法測定包封率和載藥量的方法，并進(jìn)行方法學(xué)考察。
　　 結(jié)果：HPLC法測定GM-1-PLGA微球中藥物含量，輔料不干擾測定，專屬性強，方

6、法簡便、靈敏，該法適合微球包封率的測定。在4--40μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程為A=11462C+8347.7，r=0.9991;日內(nèi)、日間精密度RSD均小于2％，平均回收率均在99％-101％之間。
　　 影響微球包封率和粒徑的主要因素為內(nèi)水相和有機(jī)溶劑體積比（W1：O）、初乳與外水相體積比(O：W2)、有機(jī)溶劑PLGA含量、渦旋速度和時間、外水相乳化劑(PVA)濃度、剪切速度和時間；通過單因素試驗后優(yōu)選以下因

7、素：渦旋時間90s，渦旋速度2800r/min，剪切速度15000r/min，剪切時間30s。在此基礎(chǔ)上采用正交設(shè)計，考察PLGA濃度、PVA濃度、內(nèi)水相和有機(jī)溶劑體積比(W1：O)、初乳與外水相體積比(O：W2)對包封率的影響。最佳處方和工藝如下：PLGA濃度為100mg/mL，PVA濃度為3％，WI:O(V:V)為1:15，o:w2(v:v)為1：25;根據(jù)優(yōu)化工藝制得三批GM-1-PLGA微球，外觀為白色粉末，流動性好，在光學(xué)顯微

8、鏡下觀察呈球形或類球型，無粘連；測得GM-1-PLGA微球的平均粒徑為（8.2-6.0）μm；包封率為（84.17+1.545）％，載藥量為（17.86+0.723）％。
　　 GM-I-PLGA微球體外釋藥有明顯的緩釋作用，GM-1-PLGA微球體外釋藥符合Wcibull equat/on，擬合曲線為1g[.M1-Q)]=0.5076ls-0.556s，r=0.9968。40℃加速試驗10d，外觀形態(tài)和含量無明顯變化。但因時間