兒童感染流感嗜血桿菌分子生物學(xué)鑒定及分型研究.pdf

1、目的：了解張家口地區(qū)兒童口咽部流感嗜血桿菌(Haemophilus infiuenza，HI)感染狀況及其對常用抗生素的耐藥情況，并對所分離出的流感嗜血桿菌進(jìn)行同源性分析，為預(yù)防、減少、控制流感嗜血桿菌感染的發(fā)生提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法：采集兒童口咽部咽拭子進(jìn)行流感嗜血桿菌的分離，通過實驗室常規(guī)分離培養(yǎng)，用V因子和X因子試驗鑒定H陽性菌株，同時用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法鑒定，進(jìn)一步用生化技術(shù)分型，用cefinase紙片檢測H

2、I的β-內(nèi)酰胺酶，用Kirby-Bauer法進(jìn)行13種抗生素的體外藥敏試驗，最后用隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性DNA(RAPD)技術(shù)進(jìn)行同源性分析。
　　 結(jié)果：100份健康兒童標(biāo)本中，共分離出HI31株，陽性率為31.0％，HI生物學(xué)分型以Ⅵ型、Ⅷ型為主，分別為32.4％，22.6％，β-內(nèi)酰胺酶陽性5株，產(chǎn)酶率16.1％;128份呼吸道感染兒童標(biāo)本中，共分離出HI49株，陽性率為38.3％，生物學(xué)分型以Ⅵ型、Ⅷ型為主，分別為38.8％，3

3、6.9％，β-內(nèi)酰胺酶陽性19株，產(chǎn)酶率38.8％;31株健康兒童分離的HI對亞胺培南、頭孢唑啉、氯霉素、氨芐西林-舒巴坦、頭孢克羅、環(huán)丙沙星、阿米卡星、四環(huán)素、阿莫西林-克拉維酸100％敏感。其中對磺胺甲惡唑-甲氧芐啶耐藥率為38.7％，對紅霉素耐藥率為16.1％，對克拉霉素耐藥率為29.0％，對氨芐西林耐藥率為16.1％;49株呼吸道感染兒童分離的HI對亞胺培南、氯霉素、頭孢克羅100％敏感，對頭孢唑啉、氨芐西林-舒巴坦、環(huán)丙沙星、

4、阿米卡星、四環(huán)素、阿莫西林-克拉維酸、磺胺甲惡唑-甲氧芐啶、紅霉素、克拉霉素、氨芐西林的耐藥率分別為為12.2％、10.2％、6.1％、2.0％、6.1％、6.1％、40.8％、42.9％、40.8％、42.9％。所分離的80株HI經(jīng)RAPD擴(kuò)增后均可獲得數(shù)量不等的條帶，條帶數(shù)在1-8之間，分型率達(dá)92.5％，經(jīng)聚類分析發(fā)現(xiàn)本地區(qū)HI在呼吸道感染兒童中存在著同型菌的流行趨勢。
　　 結(jié)論：
　　 1.本地區(qū)兒童鼻咽部HI

5、陽性率處于較高水平，生物學(xué)分型以Ⅵ型和Ⅷ型為主，與本地區(qū)10年前的研究結(jié)果相比生物型發(fā)生了改變。
　　 2.HI對亞胺培南、頭孢克羅、氯霉素具有較高的敏感性，而對磺胺甲惡唑-甲氧芐啶，氨芐西林，紅霉素、克拉霉素耐藥率較高，并且與本地區(qū)10年前的研究結(jié)果相比HI對氨芐西林的耐藥率升高。臨床應(yīng)根據(jù)藥敏試驗合理選擇抗生素。
　　 3.RAPD技術(shù)具有分辨力強(qiáng)、分型率高、簡便、快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點，可廣泛用于流感嗜血桿菌的同源性分析