版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、目的:觀察鈣結(jié)合蛋白D28k(Calbindin-D28k)在小鼠腎臟發(fā)生發(fā)育中的表達(dá)規(guī)律及定位,探討Calbindin-D28k在小鼠腎臟發(fā)生發(fā)育中的作用。 方法:選取體重25~30g健康成年昆明小白鼠,采用檢查陰道栓脫落的方法確定其受孕后,選取胚齡(E)10、12、14、16、18天的胎鼠和生后日齡(N)1、3、7、14、21、40天的仔鼠,每組取8只鼠。將各胚(日)齡小鼠剖腹取出腎臟,常規(guī)制作石蠟切片。應(yīng)用光鏡技術(shù)(LM)
2、對(duì)不同發(fā)育階段的小鼠腎臟進(jìn)行觀察;應(yīng)用免疫組織化學(xué)(IHC)染色(SABC法)及免疫熒光技術(shù)(IFT)對(duì)各組小鼠腎臟Calbindin-D28k表達(dá)進(jìn)行定性觀察;應(yīng)用圖像分析方法(CLAS-1000型細(xì)胞圖像分析系統(tǒng))對(duì)各組小鼠腎臟Calbindin-D28k表達(dá)進(jìn)行定量檢測(cè);應(yīng)用蛋白印跡技術(shù)(Westernblotting)對(duì)不同發(fā)育階段小鼠腎臟Calbindin-D28k表達(dá)進(jìn)行定量測(cè)定。 結(jié)果: 1.光鏡結(jié)果:
3、 胚齡12天,輸尿管芽出現(xiàn),在輸尿管芽周圍圍繞生后腎組織。胚齡14天,生腎區(qū)出現(xiàn),即在輸尿管芽分支周圍出現(xiàn)了小泡體、逗號(hào)小體、S小體。胚齡16天,Ⅲ、Ⅳ期腎小體出現(xiàn)。胚齡18天,早期髓質(zhì)出現(xiàn),其間散在大量間質(zhì),相當(dāng)于成年后的髓質(zhì)外帶外區(qū)。生后1天,腎臟被膜下生腎區(qū)面積減少,可見腎乳頭。生后7天,皮質(zhì)生腎區(qū)消失,腎小體發(fā)育基本成熟,輸尿管芽消失,髓放線出現(xiàn),可見近直小管,遠(yuǎn)直小管和集合管,腎乳頭可見髓質(zhì)外帶內(nèi)區(qū)。生后14天,皮質(zhì)增厚,
4、髓質(zhì)可區(qū)分為髓質(zhì)外帶內(nèi)外區(qū)。生后21天,皮質(zhì)厚度明顯增加,腎乳頭內(nèi)側(cè)可見髓質(zhì)內(nèi)帶,集合管數(shù)量增多。生后40天,腎及腎小體的發(fā)育達(dá)到成年水平,髓質(zhì)外帶以及內(nèi)帶清晰與成鼠完全相同。 2.免疫組織化學(xué)染色結(jié)果: 胚齡10天,Calbindin-D28k在胎鼠腎臟中未見表達(dá)。胚齡12天,Calbindin-D28k在輸尿管芽有所表達(dá),表達(dá)強(qiáng)度比較微弱,生后腎組織未見表達(dá)。胚齡14天,Calbindin-D28k在輸尿管芽分支表達(dá)
5、增強(qiáng),生腎區(qū)未見表達(dá)。胚齡16天,Calbindin-D28k在輸尿管芽壺腹表達(dá)強(qiáng)烈,腎小管和S小體未見表達(dá),然而S小體與輸尿管芽壺腹連接處表達(dá)。胚齡18天到生后3天,腎小囊、近端小管、髓袢未見表達(dá),而遠(yuǎn)端腎單位表達(dá)增強(qiáng)。生后7天,Calbindin-D28k定位于腎臟的遠(yuǎn)曲小管、連接小管、皮質(zhì)集合管。生后14天、21天、40天Calbindin-D28k在小鼠腎臟均有表達(dá),其表達(dá)強(qiáng)度減弱且趨于穩(wěn)定。Calbindin-D28k在小鼠腎
6、臟的表達(dá)部位在細(xì)胞胞漿內(nèi)。 3.CLAS-1000型細(xì)胞圖像分析系統(tǒng)檢測(cè): 腎臟發(fā)育不同時(shí)期Calbindin-D28k表達(dá)的灰度值有明顯的差異:胚齡12天,Calbindin-D28k表達(dá)的灰度值最高,Calbindin-D28k有一定表達(dá)。從胚齡12天到生后7天,Calbindin-D28k表達(dá)的灰度值降低,表達(dá)量逐漸增加,生后7天達(dá)高峰。從生后14天到生后40天,Calbindin-D28k表達(dá)量減少并趨于穩(wěn)定,差
7、異無顯著性意義。 4.免疫熒光結(jié)果: Calbindin-D28k在胚齡10天胎鼠腎臟未見表達(dá),胚齡12天在輸尿管芽微量表達(dá),胚齡14天在輸尿管芽Y型分支表達(dá),表達(dá)增強(qiáng),胚齡16天在輸尿管芽壺腹表達(dá)強(qiáng)烈,且在腎單位與輸尿管芽壺腹連接部有少量表達(dá)。胚齡18天到生后7天,Calbindin-D28k表達(dá)逐漸增強(qiáng),并定位于遠(yuǎn)曲小管、連接小管、皮質(zhì)集合管。生后7天到生后40天,Calbindin-D28k在遠(yuǎn)曲小管、連接小管、皮
8、質(zhì)集合管表達(dá)豐富,在髓質(zhì)集合管表達(dá)下降。Calbindin-D28k表達(dá)部位在輸尿管芽或遠(yuǎn)曲小管、連接小管、皮質(zhì)集合管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)。 5.Western blotting結(jié)果: 胚齡12天,Calbindin-D28k表達(dá)量極低,無法檢測(cè)。胚齡14天到胚齡16天,Calbindin-D28k表達(dá)量增加,差異有顯著性意義[(12.0994±0.6911),(13.2383±0.1729),P<0.01]。胚齡16天到胚齡
9、18天,Calbindin-D28k表達(dá)量無顯著性差異。胚齡18天到生后7天,Calbindin-D28k表達(dá)量明顯增加,差異有顯著性意義[(13.8447±0.2385), (15.2718±0.2019), (16.3208±0.2839),(19.3383±0.4044),P<0.01]。生后7天到生后14天,Calbindin-D28k表達(dá)量減少,差異有顯著性意義[(19.3383±0.4044),(15.8915±1.0185
10、),P<0.01]。生后14天到生后40天,Calbindin-D28k表達(dá)量無顯著性差異。 結(jié)論: 1.在小鼠腎臟發(fā)生發(fā)育中,Calbindin-D28k在胚齡12天胎鼠腎臟輸尿管芽微弱表達(dá),隨胚(日)齡增加其表達(dá)量逐漸增加,生后7天達(dá)最大水平,并定位于遠(yuǎn)曲小管、連接小管和皮質(zhì)集合管,此后表達(dá)量減少并趨于平穩(wěn)。 2.Calbindin-D28k表達(dá)部位在輸尿管芽或遠(yuǎn)曲小管、連接小管、皮質(zhì)集合管上皮細(xì)胞胞漿內(nèi)。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 腦組織特異表達(dá)鈣結(jié)合蛋白-D28k轉(zhuǎn)基因小鼠的制備與鑒定.pdf
- D28k鈣結(jié)合蛋白基因真核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建及其表達(dá)效果的研究.pdf
- 小鼠腎發(fā)生發(fā)育中BCL-2-BAX的表達(dá).pdf
- 小鼠腎發(fā)育中calbindin-d28k的定量分析
- 鈣結(jié)合蛋白Calretinin在感覺皮質(zhì)發(fā)育中的功能研究.pdf
- 研究SGT蛋白在小鼠腦發(fā)育過程中的表達(dá).pdf
- 小鼠心臟發(fā)育過程中鈣循環(huán)相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)與分布.pdf
- 成釉蛋白在小鼠牙胚發(fā)育中的表達(dá)和作用研究.pdf
- 鈣結(jié)合蛋白S100A9在小鼠銅綠假單胞菌肺炎中的表達(dá)及意義.pdf
- 電針對(duì)去卵巢大鼠腸粘膜鈣結(jié)合蛋白D9K和維生素D受體基因表達(dá)的影響.pdf
- 熱休克蛋白10在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的表達(dá)研究.pdf
- 鈣結(jié)合蛋白S100A8在橋本甲狀腺炎中的表達(dá).pdf
- ST2蛋白在胃癌中的表達(dá)及其發(fā)生發(fā)展相關(guān)性研究.pdf
- 生后小鼠腎臟發(fā)育過程中ⅳ型膠原表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
- 骨橋蛋白在ADPKD腎臟中的表達(dá)及意義.pdf
- 小鼠巢蛋白基因在神經(jīng)發(fā)育中的表達(dá)調(diào)控.pdf
- SD大鼠視網(wǎng)膜發(fā)生發(fā)育中Bcl-2及Bax的表達(dá).pdf
- RNA結(jié)合蛋白LIN28在男胎原始生殖細(xì)胞中的表達(dá).pdf
- 組蛋白乙?;竵喰驮谛∈笮呐K發(fā)育中的時(shí)空表達(dá).pdf
- 鈣離子結(jié)合蛋白A4和上皮型鈣粘附蛋白在膀胱癌中的表達(dá)及臨床意義.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論