骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7及其受體在單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎臟的表達及延腎膠囊干預實驗.pdf

1、目的：觀察骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7及其受體(BMPR-Ⅱ，ALK-2，ALK-3，ALK-6)在單側(cè)輸尿管梗阻誘導的腎間質(zhì)纖維化大鼠模型中的表達變化及其意義，同時在以前研究的基礎上進一步探討延腎膠囊延緩腎纖維化的作用及其機理。 方法：清潔級雄性成年大鼠80只隨機分為四組：(1)正常對照組(N)：大鼠不接受任何手術和治療；(2)假手術組(S)：大鼠手術剖腹后僅游離左側(cè)輸尿管但不結(jié)扎，同時術前一天開始每日給以安慰劑生理鹽水灌胃治療；(3)

2、單側(cè)輸尿管梗阻組(U)：大鼠行手術剖腹，分離并于腎盂下結(jié)扎左側(cè)輸尿管，同時術前一天開始每日給以安慰劑生理鹽水灌胃處理；(4)延腎膠囊治療組(T)：大鼠行手術剖腹，分離并結(jié)扎左側(cè)輸尿管，同時術前一天開始每日予以延腎膠囊灌胃治療。在術后1、3、7、14天，每組取5只大鼠處死，取左側(cè)腎臟行各項指標檢測，以免疫組織化學方法檢測腎組織中BMP-7、TGF-β1及α-SMA蛋白的表達水平，以逆轉(zhuǎn)錄-多聚酶鏈反應技術檢測BMP-7及其受體BMPR-Ⅱ

3、、ALK-2、ALK-3、ALK-6的mRNA表達水平。 結(jié)果：正常對照組及假手術組，BMP-7蛋白高度表達，主要分布在腎小管及腎間質(zhì)，在腎小管髓攀升支、遠曲小管、集合管均有表達，近曲小管僅有少量表達，而腎小球內(nèi)基本無表達；TGF-β1偶見于腎小管上皮細胞胞漿內(nèi)，主要在近曲小管表達，腎小球、腎間質(zhì)及腎血管內(nèi)均未見表達；α-SMA僅在血管平滑肌細胞表達，腎小球及腎小管腎間質(zhì)中均未見表達；RT-PCR結(jié)果顯示，BMP-7、BMPR-

4、Ⅱ、ALK-2、ALK-3、ALK-6mRNA均有高度表達。在單側(cè)輸尿管梗阻組隨著梗阻時間延長腎間質(zhì)損害逐漸加重，BMP-7蛋白表達呈進行性下降趨勢，而TGF-β1、α-SMA隨梗阻時間延長表達進行性增加；BMP-7蛋白表達于術后1天即明顯下調(diào)，隨梗阻時間延長減弱程度更明顯，第14天表達量最弱，幾乎沒有明顯的陽性表達；TGF-β1于術后1天即在腎間質(zhì)內(nèi)有輕微表達，腎小管上皮細胞胞漿中表達較對照組增多，且隨梗阻時間延長而進行性增加，術后1

5、4天表達最強，但各時相點腎小球均無明顯TGF-β1表達；α-SMA于術后第3天在腎間質(zhì)中表達，術后第7天表達明顯增加，腎小管上皮細胞亦有大量表達，術后14天α-SMA表達仍然維持在較高水平，但各時相點腎小球均無明顯α-SMA表達變化；RT-PCR結(jié)果顯示術后24h，BMP-7、BMPR-Ⅱ、ALK-2、ALK-3mRNA即有明顯下調(diào)，隨梗阻時間延長而逐漸降低，第14天最低，幾乎沒有表達；而各時相點ALK-6mRNA表達水平與對照組相比，

6、無明顯差別；相關分析表明BMP-7與TGF-β1和α-SMA蛋白表達陽性面積成顯著負相關。在治療組，與輸尿管梗阻組同一時相點相比，腎間質(zhì)損害程度減輕，且BMP-7蛋白表達水平有所提高，TGF-β1、α-SMA表達水平則有所下降，BMP-7及其受體mRNA表達水平有所提高。 結(jié)論：(1)在正常腎臟中有著豐富的BMP-7及其受體表達，主要表達在腎小管腎間質(zhì)，而腎小球幾乎沒有表達，髓質(zhì)區(qū)表達明顯高于皮質(zhì)區(qū)表達。(2)BMP-7及其受體