復(fù)榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎臟轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)表達(dá)影響的實驗研究.pdf

1、復(fù)榮通脈膠囊（冀藥制字Z20070041）為滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院院內(nèi)中藥復(fù)方制劑。復(fù)榮通脈膠囊作為益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)法的經(jīng)驗方，我院臨床上已廣泛應(yīng)用于糖尿病周圍神經(jīng)病變及周圍血管病變的患者，在臨床應(yīng)用過程中發(fā)現(xiàn)療效顯著，對其他血管病變及慢性并發(fā)癥也具有防治作用。為此我們設(shè)計了復(fù)榮通脈膠囊防治糖尿病慢性并發(fā)癥系列課題，本研究為其分支研究課題。
　　目的:
　　通過觀察復(fù)榮通脈膠囊對糖尿病大鼠腎組織中轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1

2、)及骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)表達(dá)水平的影響，對復(fù)榮通脈膠囊干預(yù)糖尿病腎病進(jìn)展的可能機制進(jìn)行探討，為臨床上防治糖尿病腎病的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法:
　　將60只清潔級成年雄性Wistar大鼠隨機分為兩組，正常組(NC)10只，造模組50只。將大鼠禁食12h后造模，鏈脲佐菌素(STZ)以60mg/kg劑量進(jìn)行腹腔注射;并將等量的檸檬酸鈉緩沖液腹腔注射到NC組大鼠。72h后尾靜脈采血，要求糖尿病大鼠血糖值＞16.7m

3、mol/L。造模成功后大鼠隨機抽取40只，分為糖尿病組(DM，n=10)、復(fù)榮通脈膠囊低劑量治療組(FRL，n=10)、復(fù)榮通脈膠囊中劑量治療組（FRM，n=10）、復(fù)榮通脈膠囊高劑量治療組(FRH，n=10)。成模后一周，中藥治療組劑量按人體-大鼠體表面積比值表換算出大鼠的等效劑量作為復(fù)榮通脈中劑量組，給予1.4g/（kg·d）灌胃;FRL組給予0.7g/(kg·d)灌胃，F(xiàn)RH組給予2.8g/(kg·d)灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)8周

4、。NC組和DM組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間大鼠喂標(biāo)準(zhǔn)飼料，飲水自由，保持環(huán)境溫度在22℃-26℃之間，不用胰島素及其他降糖藥物干預(yù)。灌胃治療8周后，尾靜脈取血測血糖，以3％戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹部正中切口，腹主動脈采血，收集血標(biāo)本。全自動生化分析儀檢測各組大鼠血糖、肌酐(Scr)、尿素氮（BUN）。測定血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平。取出大鼠雙腎，將腎包膜及腎門結(jié)締組織去除，先用生理

5、鹽水沖洗后稱腎重，再置于4％中性福爾馬林溶液中固定、脫水、石蠟包埋、切片厚4μm，采用免疫組化法檢測骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)。蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin stainingHE)染色在光鏡下觀察腎小球及腎小管間質(zhì)的病理變化。計量資料數(shù)據(jù)以(X)±S表示，各組間比較采用單因素方差分析，各組自身前后對照比較采用配對t檢驗，方差不齊時應(yīng)用Dunntett T3法。計數(shù)資料用X2檢驗

6、。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準(zhǔn)α=0.05。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠一般狀態(tài)
　　NC組大鼠精神好，眼睛有神，反應(yīng)敏捷，毛發(fā)平整有光澤，肌肉充盈，體型適中;各DM組大鼠毛色暗黃無光澤，精神狀態(tài)差，活動減少，攝食量、飲水量及尿量增多，體形消瘦。
　　2、腎重/體重比的變化
　　經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組腎重/體重比明顯升高(P＜0.05);與DM組比

7、較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組腎重/體重比明顯下降(P＜0.05);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組腎重/體重比明顯下降(P＜0.05);FRM組與FRH組組間相比腎重/體重比無明顯差別(P＞0.05)。
　　3、生化指標(biāo)的變化
　　3.1 血糖的變化
　　造模前各組大鼠的血糖相比無差異（P＞0.05）。治療前，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖均顯著升高(P＜0.05);而DM組及FRL、FRM、F

8、RH組各組間血糖相比無差異（P＞0.05）。經(jīng)灌胃治療8周后，各組血糖與治療前相比無差異(P＞0.05);與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠的血糖顯著升高(P＜0.05);DM組及FRL、FRM、FRH組各組間血糖相比無差異(P＞0.05)。
　　3.2 腎功能的變化
　　經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠血清肌酐、尿素氮水平明顯升高(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL

9、組血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(P＞0.05)，而FRM、FRH組血清肌酐、尿素氮水平明顯下降（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清肌酐、尿素氮水平明顯下降(P＜0.05);FRM、FRH組間比較，血清肌酐、尿素氮水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　4、對腎臟組織的病理學(xué)觀察
　　光鏡下顯示，NC組為腎小球血管袢薄而清晰，內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞數(shù)目正常，周圍的腎小管也正常。DM組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、系膜細(xì)胞增

10、多;腎小管上皮腫脹，甚至壞死;腎間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤，血管擴張充血。FRL組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞增生、腫脹、系膜細(xì)胞數(shù)目增多;腎小管上皮腫脹，甚至壞死;腎間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤伴有血管擴張充血;FRM、FRH組腎小球內(nèi)皮細(xì)胞和系膜細(xì)胞數(shù)目大致正常，內(nèi)皮細(xì)胞稍腫脹，腎小管上皮形態(tài)正常，無腫脹、壞死;腎間質(zhì)有散在炎性細(xì)胞浸潤。
　　5、SOD與MDA的變化
　　5.1 SOD的變化經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組

11、各組大鼠血清SOD水平明顯下降(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組各組大鼠血清SOD水平明顯升高(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清SOD水平明顯升高（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，血清SOD水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　5.2 MDA的變化經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠血清MDA水平明顯升高(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、F

12、RM、FRH組各組大鼠血清MDA水平明顯下降（P＜0.05）。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組血清MDA水平明顯下降（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，血清MDA水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　6、大鼠腎臟BMP-7及TGF-β1的表達(dá)
　　6.1 BMP-7在正常大鼠腎臟組織中正常表達(dá)，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠腎臟組織中BMP-7表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。與DM組比較，F(xiàn)RL、

13、FRM、FRH組大鼠腎臟組織中BMP-7表達(dá)明顯增多(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組表達(dá)明顯增多（P＜0.05）。FRM、FRH組組間比較，表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　　6.2 TGF-β1在正常大鼠腎臟組織中有少量表達(dá)，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組各組大鼠腎臟組織中TGF-β1表達(dá)明顯增多，有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。與DM組比較，F(xiàn)RL、FRM、FRH組大鼠腎臟組織中TGF-β1表

14、達(dá)明顯減少(P＜0.05)。與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組表達(dá)明顯減少（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1、本研究復(fù)制的糖尿病大鼠模型經(jīng)過8周后存在腎臟的損害。
　　2、復(fù)榮通脈膠囊對糖代謝無影響。
　　3、復(fù)榮通脈膠囊能夠降低血尿素氮、肌酐的水平。
　　4、復(fù)榮通脈膠囊能夠抑制糖尿病大鼠血清MDA水平的升高，并且能夠抑制SOD水平的下降。