復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠胸主動脈eNOS、ADMA及NF-κB表達影響的實驗研究.pdf

1、目的:通過觀察益氣養(yǎng)陰、活血通絡的中藥復方制劑一復榮通脈膠囊對糖尿病大鼠eNOS、ADMA、NF-κB表達的影響，進一步闡述其防治糖尿病血管病變的作用機制，為臨床應用提供理論依據(jù)。
　　方法:60只成年雄性Wistar大鼠隨機分為兩組，正常對照組10只，造模組50只。造模組大鼠禁食12h后，一次性腹腔注射STZ60mg/kg(STZ臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液配成濃度為1％、 pH=4.2的溶液)，正常組腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩

2、沖液。72h后尾靜脈取血，測血糖≥16.7mmol/L，確定為糖尿病大鼠。成模后，隨機抽取40只分為糖尿病組（10只）及復榮通脈膠囊低劑量組（10只）、復榮通脈膠囊中劑量組(10只)、復榮通脈膠囊高劑量組（10只）。復榮通脈膠囊中劑量組給予1.4g/（kg體重）灌胃、復榮通脈膠囊低劑量組給予0.7g/（kg體重）灌胃、復榮通脈膠囊高劑量組給予2.8g/（kg體重）灌胃，其余兩組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃。實驗期間，各組大鼠自由進食水。

3、連續(xù)灌胃8周后，禁食12h以3％戊巴比妥(80mg/kg)腹腔注射麻醉，迅速開腹，分離胸主動脈從胸主動脈采血，取2mL分離血清測定ADMA。留取胸主動脈時，另留取一段以4％多聚甲醛固定，HE染色觀察形態(tài)學變化，SP法免疫組化染色觀察病理切片組織中陽性染色面積及強度。計量資料均采用(X)±S表示，各組自身前后比較采用配對t檢驗;各組間比較采用單因素方差分析，方差不齊時應用多個獨立樣本比較的Kruskal-Wallis H檢驗，所有數(shù)據(jù)用S

4、PSS16.0軟件統(tǒng)計處理，檢驗水準α=0.05。
　　結果:
　　1、對大鼠一般狀態(tài)的影響糖尿病組及復榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組大鼠精神狀態(tài)差，飲水量增多，尿量增多，毛色晦暗無光澤，反應遲鈍，抱團少動。
　　2、對血糖的影響治療前，與正常對照組相比，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量組血糖明顯升高(P＜0.05);治療前，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量組間相比血糖無明顯差異（P＞0.05）。治療后，與正常

5、對照組相比，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量組血糖明顯升高(P＜0.05);治療后，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量組間相比血糖無明顯差異(P＞0.05)。各組大鼠治療前后血糖無明顯差異（P＞0.05）。
　　3、對膽固醇、甘油三酯的影響灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組膽固醇明顯升高(P＜0.05);糖尿病組與復榮通脈膠囊低、中、高劑量組組間相比膽固醇無明顯差異(P＞0.05)。

6、治療后，與正常對照組相比，糖尿病組、復榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組甘油三酯明顯升高（P＜0.05）;糖尿病組與復榮通脈膠囊低、中、高劑量組組間相比甘油三酯無明顯差異(P＞0.05)。
　　4、對血管組織形態(tài)學的影響光鏡下觀察HE染色后各組大鼠胸主動脈形態(tài)學改變:正常對照組血管形態(tài)正常，內皮細胞排列緊密，內膜完整，未見炎性細胞及不定形物質沉積;糖尿病組可見動脈內膜增厚，內膜斷裂不完整，部分內膜向腔內突起，可見泡沫細胞，中膜可見較多

7、大小不等的裂隙，平滑肌細胞排列紊亂;復榮通脈膠囊低、中、高劑量治療組胸主動脈形態(tài)介于正常對照組與糖尿病組之間，低劑量治療組光鏡下可見動脈內膜增厚，部分內皮細胞脫落消失，偶可見泡沫細胞;復榮通脈膠囊中、高劑量治療組光鏡下無明顯差別，內膜較完整，偶見內皮細胞脫落。
　　5、對血清ADMA的影響灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組及復榮通脈膠囊低、中、高劑量組血清ADMA明顯升高(P＜0.05);與糖尿病組相比，復榮通脈膠囊低、中

8、、高劑量組血清ADMA明顯降低(P＜0.05);與復榮通脈膠囊低劑量組相比，復榮通脈膠囊中、高劑量組血清ADMA水平明顯降低（P＜0.05）;復榮通脈膠囊中劑量組與高劑量組間無明顯差異(P＞0.05)。
　　6、對大鼠胸主動脈NF-κB表達的影響灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組及復榮通脈膠囊低、中、高劑量組NF-κB表達明顯升高(P＜0.05);與糖尿病組相比，復榮通脈膠囊低、中、高劑量組NF-κB表達明顯降低(P＜0.

9、05);與復榮通脈膠囊低劑量組相比，復榮通脈膠囊中、高劑量組NF-κB表達明顯降低(P＜0.05);復榮通脈膠囊中劑量組與高劑量組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　7、對大鼠胸主動脈eNOS表達的影響灌胃治療8周后，與正常對照組相比，糖尿病組及復榮通脈膠囊低、中、高劑量組eNOS表達明顯降低(P＜0.05);與糖尿病組相比，復榮通脈膠囊低、中、高劑量組eNOS表達明顯升高(P＜0.05);與復榮通脈膠囊低劑量組相比，復榮通脈膠

10、囊中、高劑量組eNOS表達明顯升高(P＜0.05);復榮通脈膠囊中劑量組、高劑量組相比無明顯差異(P＞0.05)。
　　結論:
　　1、大鼠中NF-κB表達強弱及ADMA水平與胸主動脈病理變化相一致，eNOS表達強弱與胸主動脈病理變化相反，提示糖尿病血管病變的發(fā)生發(fā)展中，eNOS、ADMA和NF-κB均起重要作用。
　　2、DM大鼠胸主動脈中NF-κB表達增強而eNOS表達降低，血清ADMA水平升高，提示糖尿病血管病變

11、中，NF-κB和ADMA可能存在相互作用，NF-κB和eNOS之間可能存在相互拮抗。
　　3、復榮通脈膠囊各治療組大鼠胸主動脈形態(tài)學均較DM組改善，提示復榮通脈膠囊對血管組織具有保護作用，對糖尿病大血管病變有一定治療作用。
　　4、復榮通脈膠囊各治療組大鼠與DM組比較，血清ADMA水平及NF-κB表達降低，eNOS表達增強，提示復榮通脈膠囊可降低血清ADMA水平，抑制NF-κB、促進eNOS在大鼠胸主動脈的表達。