GTPCHⅠ在糖尿病大鼠主動脈的表達及意義.pdf

1、目的： 糖尿病患者存在內(nèi)皮依賴性血管舒張(endothelial dependent vascular rela，EDVR)減弱已得到廣泛認同，先前研究顯示血管內(nèi)皮功能障礙主要由內(nèi)皮源性一氧化氮(nitric oxide,NO)生物利用度下降及氧自由基如超氧陰離子增加所致，但NO生物利用度下降的細胞內(nèi)和生化機制尚未闡明。四氫生物蝶呤(tetrahydrobiopterin,BH4)是一氧化氮合成酶(nitric oxide sy

2、nthase,NOS)的必要輔助因子，研究顯示BH4與EDVR減弱密切相關(guān)。BH4充足時，NOS催化底物L-精氨酸和O<,2>生成L-胍氨酸和NO；BH4缺乏時，NOS則發(fā)生脫偶聯(lián)，主要催化超氧陰離子產(chǎn)生，NO產(chǎn)生減少同時滅活增加，過氧化亞硝基形成，共同導(dǎo)致EDVR減弱。Ⅰ型三磷酸鳥苷環(huán)化水解酶(guanosine triphosphate cyclohydrolase I,GTPCH Ⅰ)，是BH4從頭合成的限速酶，控制著細胞內(nèi)BH4

3、的濃度。糖尿病EDVR減弱時GTPCH Ⅰ的基因表達、活性和調(diào)控如何，是近年血管內(nèi)皮功能異常發(fā)生機制的研究熱點之一。高糖培養(yǎng)的離體牛主動脈和鏈脲霉素誘導(dǎo)的糖尿病大鼠主動脈中均顯示GTPCH Ⅰ的表達和BH4水平顯著下降，NO合成減少及氧自由基增加，提示高血糖可能是通過影響GTPCH Ⅰ的mRNA表達和活性最后導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷。那么2型糖尿病時，GTPCH Ⅰ是否參與了血管內(nèi)皮功能異常的發(fā)生?抗氧化劑硫辛酸可改善血管內(nèi)皮舒張，是否通過影響

4、GTPCH Ⅰ的mRNA表達?本研究欲利用2型糖尿病大鼠模型，探討血管內(nèi)皮功能異常狀態(tài)下，GTPCH Ⅰ在2型糖尿病及硫辛酸干預(yù)大鼠主動脈中的表達。這將有助于理解它在血管內(nèi)皮功能異常中的作用，為防治血管疾病尋找有效措施。材料與方法： 健康雄性Wistar大鼠35只，體重180-220g。隨機選出10只作為正常對照組(NC組)，另外25只以高脂飼料飼養(yǎng)8周后，采用鏈脲佐菌素(streptozotoein,STZ)溶液腹腔一次性注

5、射建立2型糖尿病模型(成模21只)，確定成模后隨機分為2組：2型糖尿病組(T2DM組，11只)，硫辛酸干預(yù)組(LA組，10只)。LA組每日腹腔注射一次硫辛酸50mg/Kg，每周5天，共6周。所有大鼠飼養(yǎng)16周后處死，取血測定糖化血紅蛋白、血脂等生化指標，并觀察離體主動脈環(huán)的內(nèi)皮依賴性舒張反應(yīng)，利用用逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測主動脈GTPCHItuRNA含量。 結(jié)果： 1、實驗終止時，T2DM組和

6、LA組大鼠的體重、血糖、糖化血紅蛋白、胰島素、血脂明顯高于NC組大鼠(p<0.05)；而T2DM組和LA組大鼠之間無統(tǒng)計學差異。 2、體外實驗顯示，與NC組相比，T2DM組和LA組大鼠離體主動脈的EDVR．明顯減弱；而LA組較T2DM組有明顯改善。差別均有統(tǒng)計學意義(p<0.05)。 3、RT-PCR結(jié)果顯示三組大鼠主動脈中均含GTPCHImRNA。與NC組相比，大鼠主動脈中GTPCHImRNA表達在T2DM組下降7