復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、復(fù)榮通脈膠囊（批準(zhǔn)文號(hào):冀藥制字Z20070041）是河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院院內(nèi)的益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)類中藥復(fù)方制劑，臨床用于治療氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)型糖尿病周圍血管病變及周圍神經(jīng)病變。在臨床應(yīng)用過程依據(jù)其藥物組成及治療原則，曾試用于糖尿病腎病，效果顯著。本課題從實(shí)驗(yàn)方面研究復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎臟血小板源性生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)表達(dá)影響，探討其治療糖尿病腎病的作用機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)，

2、進(jìn)而從抑制PDGF-BB和調(diào)節(jié)MMP-9表達(dá)方面了解益氣養(yǎng)陰活血通絡(luò)類中藥治療糖尿病腎病的作用。
　　目的:
　　復(fù)制糖尿病大鼠模型，觀察復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖尿病大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9表達(dá)的影響，探討復(fù)榮通脈膠囊治療糖尿病腎病的機(jī)理，為臨床上中醫(yī)藥治療糖尿病腎病提供可靠的試驗(yàn)依據(jù)。
　　方法:
　　Wistar大鼠（成年健康雄性，n=60），隨機(jī)分為正常對(duì)照組大鼠（NC組，n=10）和造模組大鼠50只。造

3、模組大鼠禁食12小時(shí)后，腹腔一次性注射鏈脲佐菌素(STZ)60mg/kg（STZ臨用前用0.1M檸檬酸鈉緩沖液配成濃度為1％、pH=4.2的溶液）建立糖尿病大鼠模型，NC腹腔注射等量的檸檬酸鈉緩沖液。72小時(shí)后取尾靜脈血測(cè)末梢血糖，血糖值＞16.7mmol/L即確定為糖尿病大鼠。造模成功后大鼠隨機(jī)抽取40只，分為糖尿病模型組(DM，n=10)、復(fù)榮通脈膠囊低劑量治療組(FRL，n=10)、復(fù)榮通脈膠囊中劑量治療組（FRM，n=10）、復(fù)

4、榮通脈膠囊高劑量治療組(FRH， n=10)。成模后一周，按人體-大鼠體表面積比值表?yè)Q算出大鼠的等效劑量，為復(fù)榮通脈中劑量組給予1.4g/(kg·d)灌胃、復(fù)榮通脈低劑量組給予0.7g/(kg·d)灌胃、復(fù)榮通脈高劑量組給予2.8g/(kg·d)灌胃，其余兩組每日給予同等劑量生理鹽水灌胃，每日灌胃1次，連續(xù)8周。實(shí)驗(yàn)期間大鼠喂標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由進(jìn)食水。灌胃治療8周后禁食12h，尾靜脈取血測(cè)血糖，以3％戊巴比妥鈉80mg/kg腹腔注射麻醉大鼠

5、，腹部正中切口，腹主動(dòng)脈采血，收集血標(biāo)本。取血后摘取大鼠的腎臟，去除腎包膜及腎門結(jié)締組織并用生理鹽水沖洗后稱重，將腎臟切割成小于0.5cm×0.5cm×0.1 cm的組織塊，置于4％中性福爾馬林溶液中固定，HE染色在光鏡下觀察腎小球及腎小管間質(zhì)的形態(tài)學(xué)變化，SP法免疫組化觀察病理切片組織中陽(yáng)性染色面積及強(qiáng)度。所有數(shù)據(jù)用SPSS16.0軟件統(tǒng)計(jì)處理，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以(X)±SD表示，組內(nèi)治療前后比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)，各組

6、間比較采用單因素方差分析，方差不齊時(shí)應(yīng)用多個(gè)獨(dú)立樣本比較的Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。
　　結(jié)果:
　　1、對(duì)大鼠一般狀態(tài)的影響
　　正常組大鼠精神狀態(tài)良好，眼睛有神，反應(yīng)敏捷，毛發(fā)明亮有光澤，體型健壯，飲食水量增加，尿量及大便性狀正常。糖尿病組和復(fù)榮通脈膠囊低、中、高劑量組大鼠精神萎靡，反應(yīng)遲鈍，毛色晦暗無光澤，抱團(tuán)少動(dòng)，體形瘦小，飲水量明顯增多，尿量增多。
　　2、對(duì)體重的影響
　　造模前和治療

7、前各組大鼠的體重相比無差異(P＞0.05);經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組體重明顯降低（P＜0.05），DM組及FRL、FRM、FRH組間體重比較無差異(P＞0.05);NC組大鼠8周后體重比8周前明顯增加(P＜0.05)，DM組及FRL、FRM、FRH組間大鼠治療后體重比治療前明顯降低(P＜0.05)。
　　3、對(duì)右腎重/體重比的影響
　　經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組比較，DM組及FRL組、

8、FRM組、FRH組腎重/體重比明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組腎重/體重比無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM組、FRH組腎重/體重比明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM組、FRH組腎重/體重明顯降低（P＜0.05）;FRM組和FRH組比較腎重/體重比無明顯差別(P＞0.05)。
　　4、對(duì)生化指標(biāo)的影響
　　4.1 對(duì)血糖的影響
　　造模前各組大鼠的血糖相比無差異(P＞0.05);治療前，與

9、NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖均顯著升高(P＜0.05)，而DM組及FRL、FRM、FRH組間血糖比較無差異(P＞0.05)。經(jīng)灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖，均顯著升高(P＜0.05)，而DM組及FRL、FRM、FRH組大鼠血糖比較無差異（P＞0.05）;各組大鼠血糖與治療前相比無明顯差異（P＞0.05）。
　　4.2 對(duì)血脂的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組

10、相比，DM組及FRL、FRM、FRH組TG、TC水平明顯升高(P＜0.05);DM組、FRL組、FRM組及FRH組組間比較TG、TC水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　4.3 對(duì)腎功能的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組Scr、BUN水平明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組Scr、BUN水平無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組Scr、BUN水平下降明顯(P＜0.05

11、);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組Scr、BUN水平明顯降低（P＜0.05）; FRM、FRH組間比較，Scr、BUN水平無明顯差異（P＞0.05）。
　　4.4 對(duì)CRP的影響
　　灌胃治療8周后，與NC組相比，DM組及FRL、FRM、FRH組CRP水平明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組CRP水平無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組CRP水平明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較， FRM、FRH

12、組CRP水平明顯降低（P＜0.05）。FRM、FRH組間比較，CRP水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　5、對(duì)腎臟組織形態(tài)學(xué)的影響
　　光鏡下顯示，正常組大鼠腎臟腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常，腎間質(zhì)無炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，血管無擴(kuò)張充血;糖尿病模型組腎臟結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，如腎小球內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、系膜細(xì)胞增多，腎小管上皮腫脹，腎間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，血管擴(kuò)張充血。復(fù)榮通脈膠囊低劑量組腎小球系膜細(xì)胞及基質(zhì)輕度彌漫性增生，局灶節(jié)段性加重，內(nèi)皮細(xì)胞增生、

13、腫脹，基底膜空泡變性;腎小管上皮空泡及顆粒變性，灶狀萎縮，腎間質(zhì)灶狀淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，灶狀纖維化，小動(dòng)脈管壁輕度增厚，與模型組比較無明顯變化;復(fù)榮通脈膠囊中、高劑量組腎小球系膜細(xì)胞及基質(zhì)輕度節(jié)段性增生，上皮細(xì)胞未見著變;腎小管上皮空泡及顆粒變性，未見萎縮，腎間質(zhì)小灶淋巴單核細(xì)胞浸潤(rùn)，未見纖維化，小動(dòng)脈管壁未見增厚，但中、高劑量組間比較無明顯差異。
　　6、對(duì)大鼠腎臟PDGF-BB和MMP-9的影響
　　6.1 PDGF-BB

14、在正常大鼠腎臟有少量表達(dá)，與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組PDGF-BB表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組PDGF-BB表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），F(xiàn)RM、FRH組PDGF-BB表達(dá)明顯降低（P＜0.05）;與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組PDGF-BB表達(dá)明顯降低(P＜0.05);FRM、FRH組比較PDGF-BB表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)。
　　6.2 MMP-9在正常大鼠腎臟正常表達(dá)，

15、與NC組比較，DM組及FRL、FRM、FRH組MMP-9表達(dá)明顯降低(P＜0.05);與DM組比較，F(xiàn)RL組MMP-9表達(dá)無明顯差異(P＞0.05)，F(xiàn)RM、FRH組MMP-9表達(dá)明顯升高(P＜0.05);與FRL組比較，F(xiàn)RM、FRH組MMP-9表達(dá)明顯升高(P＜0.05);FRM、FRH組間比較，MMP-9表達(dá)無明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1、復(fù)榮通脈膠囊對(duì)糖脂代謝無影響。
　　2、本實(shí)驗(yàn)復(fù)制的糖尿

16、病大鼠模型8周后腎重/體重比、Scr、BUN明顯升高，腎損害存在明確，且血清CRP明顯升高，PDGF-BB表達(dá)升高，腎臟MMP-9表達(dá)降低。經(jīng)復(fù)榮通脈膠囊治療8周后腎重/體重比下降，Scr、BUN明顯下降，腎損害減輕，表明復(fù)榮通脈膠囊具有減輕糖尿病大鼠腎臟的肥大、降低尿素氮和肌酐的作用，還能抑制血清CRP的升高，能抑制PDGF-BB表達(dá)的升高，能抑制腎臟MMP-9表達(dá)的下降，通過以上機(jī)制延緩糖尿病大鼠的腎臟損害。
　　3、本實(shí)驗(yàn)表