黃芪、水蛭有效組分對大鼠系膜細胞NF-κB、IκB、PDGF-BB、MMP-9的影響.pdf

1、在我國原發(fā)性腎小球疾病中，系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)是較為常見的病理類型，該病的主要發(fā)病機制是系膜細胞增殖和細胞外基質沉積，這兩種因素最終導致腎小球硬化發(fā)生，病情進一步可發(fā)展為腎功能損害，終末期腎病是該病最嚴重的后果。目前常用的治療藥物多為免疫抑制劑、抗血小板制劑、糖皮質激素以及對癥處理等，在臨床治療中取得一定效果，但其副作用顯著且易復發(fā)。近年來研究表明，健脾益腎、活血化瘀通絡等中藥在該疾病應用中取得明顯療效，特別是以黃芪、水蛭

2、為代表的益氣化瘀藥物，已有大量文獻報道中藥能夠減少細胞增殖，調控細胞的凋亡，減少細胞外基質的沉積，改善腎臟纖維化程度，延緩疾病進展成為腎小球硬化。
　　國內外學者研究表明，系膜細胞增殖與核轉錄生長因子(NF-κB)的激活導致的炎癥介質的釋放及細胞外基質生成與降解的失衡息息相關，而NF-κB的激活與核轉錄生長因子抑制因子（IκB）的磷酸化及降解有密切關系;基質金屬蛋白酶(MMPs)是一個維持細胞基質生成與降解平衡的系統(tǒng)，一旦平衡被打

3、破，則生成與降解失調，基質沉積。本實驗擬從NF-κB、IκB、MMP-9、PDGF-BB等因子入手探討黃芪、水蛭有效成分抑制系膜細胞增殖的機理。
　　目的:探索黃芪、水蛭不同有效組分對經(jīng)過脂多糖(LPS)誘導的大鼠MC的影響，以NF-κB、IκB、PDGF-BB、MMP-9等因子為切入點，探討黃芪、水蛭不同有效組分發(fā)揮作用的機制。
　　方法:LPS誘導大鼠系膜細胞(HBEH)增殖后，分別采用黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、水

4、蛭素進行干預，24小時后收集細胞，采用CCK-8法觀察各單體及含藥血清對HBEH的增殖抑制率，Western blotting NF-κB、IκB蛋白的表達，Real time PCR法測定PDGF-BB、MMP-9 mRNA水平的表達變化。
　　結果:1.Western blotting法顯示:模型組系膜細胞經(jīng)過LPS誘導增殖后NF-κB蛋白量比正常組增多，兩組相比(P＜0.05)，而黃芪多糖、黃芪甲苷、毛瑞異黃酮、水蛭素各實驗

5、組與模型組相比NF-κB的蛋白量均降低(P＜0.05)，表明給藥物均有作用。而各藥物組蛋白量相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　2.Western blotting法顯示:模型組系膜細胞經(jīng)過LPS誘導增殖后，IκB蛋白表達量比正常組顯著降低，兩組相比(P＜0.05)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮各實驗組IκB蛋白量比模型組高，相比(P＜0.05)，水蛭素組無明顯升高?？梢钥闯?，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮均可以不同程度

6、的抑制IκB的磷酸化，而水蛭素組無明顯升高。
　　3.Real time PCR法顯示:模型組系膜細胞經(jīng)過LPS誘導增殖后，MMP-9mRNA表達比正常組顯著增加，兩組相比(P＜0.01)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、水蛭素各實驗組MMP-9mRNA的量比模型組均降低，相比(P＜0.01)，表明各藥物均有作用。而各藥物基因表達量相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　4.Real time PCR法顯示:模型組系膜細

7、胞經(jīng)過LPS誘導增殖后，PDGF-BBmRNA表達比正常組顯著增加，兩組相比(P＜0.01)，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛瑞異黃酮、水蛭素各實驗組PDGF-BB mRNA的量比模型組均降低，相比(P＜0.01)，說明各藥物均有作用。而各藥物相比P＞0.05，說明各組間差別不大。
　　結論:黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮及水蛭素能夠降低LPS誘導HEBH增殖后NF-κB、MMP-9、PDGF-BB的表達，黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮均可