大鼠局灶性腦缺血TWEAK、NF-κB及MMP-9的動態(tài)表達及缺血預(yù)處理的神經(jīng)保護作用.pdf

1、目的：因其高發(fā)生率、高致死率和致殘率，腦中風(fēng)越來越受到人們的重視。缺血性腦中風(fēng)的常見原因是大腦中動脈閉塞(middle cerebral artery occlusion，MCAO)。缺血性損傷后引起一系列病理級聯(lián)反應(yīng)，其中炎癥反應(yīng)是其中比較重要的反應(yīng)過程。腦缺血耐受(brain ischcmic tolerancc，BIT)是指提前給機體小劑量的有害刺激，即進行腦缺血預(yù)處理(cerebral ischemic precondition

2、ing，CIP)后，可明顯減輕隨后嚴重的腦缺血所造成的腦組織細胞損害的現(xiàn)象。該現(xiàn)象表現(xiàn)出的內(nèi)源性神經(jīng)保護作用，為研究腦缺血的神經(jīng)保護機制提供了新型思路。目前已有研究證實，炎癥介質(zhì)在腦缺血耐受中起著重要作用。腫瘤壞死因子樣凋亡的微弱誘導(dǎo)劑(tumor necrosis factor-like weak inducer ofapoptosis，TWEAK)是一個炎性因子，在炎癥反應(yīng)中可以誘導(dǎo)多種基因產(chǎn)物的表達。腦缺血后，TWEAK通過激活核

3、因子-κB(nuclear factor kappa B，NF-κB)信號通路調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶9(matrix metalloproteinascs9，MMP-9)的表達，從而影響神經(jīng)血管單元(neurovascular unit，NVU)。缺血預(yù)處理抑制NF-κB通路，通過調(diào)控炎性因子及細胞因子等的增減，產(chǎn)生腦缺血耐受，對神經(jīng)系統(tǒng)具有保護作用。本實驗用大鼠大腦中動脈阻塞造成腦缺血模型，觀察缺血預(yù)處理后大鼠腦缺血模型上TWEAK、NF

4、-κB及MMP-9的表達，旨在探討缺血預(yù)處理的神經(jīng)保護作用及耐受缺血與TWEAK、NF-κB及MMP-9的關(guān)系。
　　 方法：采用成年健康雄性SPF級Sprague-Dawley大鼠，隨機分為實驗組、對照組、假手術(shù)組、正常組。利用線栓法阻塞大腦中動脈以制作大鼠局灶性腦缺血模型，MCAO10min作為IP，IP后48線栓法永久性阻塞大腦中動脈，造成腦梗死模型。對所有大鼠進行神經(jīng)功能評分后，按PMCAO后6h、24h、48h、72h

5、不同時間點處死大鼠。干濕重法測量腦組織含水量，2％2，3，5-氯化三苯基四氮唑(triphenyltetrazoliumchloride，TTC)染色法計算腦梗死體積，免疫組織化學(xué)法和逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈反應(yīng)(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)檢測TWEAK、NF-κB及MMP-9的表達。
　　 結(jié)果：⑴實驗組和對照組大鼠麻醉清醒后，均出現(xiàn)不同程度的左側(cè)肢體偏

6、癱癥狀。實驗組神經(jīng)功能缺損癥狀較對照組明顯減輕(P<0.05)，假手術(shù)組無此類似癥狀。⑵實驗組的腦含水量與對照組比較有顯著性意義(P<0.05)；實驗組與假手術(shù)組比較及對照組與假手術(shù)組比較均有顯著差異，具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。⑶假手術(shù)組和正常組腦組織TTC染色呈均勻紅染，無梗死灶，實驗組及對照組腦組織出現(xiàn)白色梗死灶。其中實驗組中腦梗死體積明顯小于對照組，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。⑷TWEAK、NF-κB及MMP-9蛋

7、白的表達：腦缺血6h后陽性細胞數(shù)目增多，與假手術(shù)組比較差異具有顯著性。24h陽性細胞數(shù)目達最高峰，48h陽性細胞數(shù)與24h比較下降，72h降的更低。與對照組相比.實驗組的陽性細胞數(shù)明顯減少。TWEAK與NF-κB及TWEAK與MMP-9兩兩比較，在梗死后各時間點的蛋白表達呈顯著性正相關(guān)。⑸TWEAK、NF-κB及MMP-9 mRNA的表達：實驗組mRNA的表達在腦缺血6h時與假手術(shù)組比較有差異，24h時mRNA的表達最高，48h略有下降

8、，72h表達量更低，但與假手術(shù)組比較仍有差異。實驗組mRNA的表達比對照組少。TWEAK、NF-κB及MMP-9的梗死后各時間點的mRNA表達呈顯著性正相關(guān)。
　　 結(jié)論：TWEAK、NF-κB及MMP-9在腦缺血后的腦組織中的表達顯著升高，并且三者表達具有密切相關(guān)性。缺血預(yù)處理可以改善神經(jīng)癥狀，減輕腦水腫，減小腦梗死體積，抑制了腦缺血后TWEAK、NF-κB及MMP-9表達的升高。缺血預(yù)處理誘導(dǎo)產(chǎn)生腦缺血耐受，具有神經(jīng)保護作用