柚皮素對大鼠局灶性腦缺血損傷的保護作用及對NOD2、RIP2、NF-κB、MMP-9和claudin-5表達影響的研究.pdf

1、目的:腦血管病被認為是危害人類健康的三大疾病之一，尤其是缺血性腦血管病以其較高的發(fā)病率、致殘率、死亡率、復發(fā)率給人類生命造成了嚴重威脅。腦缺血后繼發(fā)性腦損傷是病情加重及影響預后的重要原因，包括炎癥反應、氧化應激、鈣超載、谷氨酸的興奮毒性、細胞凋亡及線粒體功能異常等因素。其中炎癥反應在腦血管病中的作用機制日益得到重視，如何減輕梗死后炎癥反應成為治療的重要方法。近年來，隨著對免疫炎癥研究的深入，nucleotideoligomerizati

2、ondomain-likereceptors2(NOD2)/receptor-interactingprotein2(RIP2)誘導的nuclearfactorkappaB(NF-κB)信號通路被證實參與腦缺血后炎癥反應，而下調該通路可以減輕缺血后的炎癥反應，發(fā)揮腦保護作用。大量的藥理和臨床研究發(fā)現(xiàn)柚皮素(Naringenin，NG)具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗病毒、抗腫瘤等多種藥理作用。由于柚皮素是脂溶性的，容易透過血腦屏障，已有實驗

3、研究證明柚皮素可以對帕金森病，阿爾茨海默氏病等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)揮腦保護作用。但有關柚皮素在腦梗死急性期的保護作用及機制的研究甚少。本實驗在大鼠永久性大腦中動脈閉塞(PermanentMiddleCerebralArteryOcclusion，pMCAO)所致腦缺血模型上觀察局部腦缺血后柚皮素的神經(jīng)保護作用及其可能的機制。
　　 方法:采用健康成年雄性Sprague-Dawley大鼠，應用改良的Longa線栓法建立大鼠右側pMC

4、AO模型。120只實驗動物隨機分為假手術組(Sham)、單梗組(pMCAO)、對照組(Vehicle)、柚皮素小劑量組(naringenin50mg/kgperday，NG-L)、柚皮素大劑量組(naringenin100mg/kgperday,NG-H)。術后24h對各組大鼠進行神經(jīng)功能評分。評分完畢后將動物斷頭處死，用干濕重法檢測腦組織含水量，用2％2，3，5-三苯基四唑氮紅(Triphenyltetrazoliumchloride

5、，TTC)染色法測量腦梗死體積，用免疫組織化學（Immunohistochemistry）、蛋白印記(Westernblot)和實時熒光定量逆轉錄多聚酶鏈反應(Real-timereversetranscription-quantitativePCR,RT-qPCR)測定缺血大腦皮層NOD2、RIP2、NF-κB、MMP-9和claudin-5的表達。
　　 結果:
　　 1Sham組無神經(jīng)功能缺損，而pMCAO、Veh

6、icle組、柚皮素小劑量組和柚皮素大劑量組大鼠均出現(xiàn)不同程度的左側肢體偏癱。柚皮素大劑量組的神經(jīng)功能評分在24h低于pMCAO組和Vehicle組，差異有統(tǒng)計學意義（pMCAOgroupvs.NG-Hgroup:3.38±0.16vs.2.67±0.20，P＜0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:3.42±0.13vs.2.67±0.20，P＜0.05）。柚皮素小劑量組與pMCAO組和Vehicle組相比，神經(jīng)功能

7、評分有所改善，但差異無統(tǒng)計學意義（pMCAOgroupvs.NG-Lgroup:3.38±0.16±vs.3.04±0.13,P＞0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:3.42±0.13vs.3.04±0.13，P＞0.05)。
　　 2柚皮素大劑量組病變側腦組織含水量在24h時低于pMCAO組和Vehicle組，差異有統(tǒng)計學意義(pMCAOgroupvs.NG-Hgroup:85.46±0.40％vs.8

8、3.17±0.55％,P＜0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:85.15±0.32％vs.83.17±0.55％，P＜0.05）。柚皮素小劑量組與pMCAO組和Vehicle組相比，腦組織含水量有所改善，但差異無統(tǒng)計學意義(pMCAOgroupvs.NG-Lgroup:85.46±0.40％vs.84.36±0.38％，P＞0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:85.15±0.32％vs.8

9、4.36±0.38％，P＞0.05)。
　　 3與pMCAO組和Vehicle組相比，柚皮素大劑量組梗塞體積在24h明顯減小，差異有統(tǒng)計學意義(pMCAOgroupvs.NG-Hgroup:44.35±2.23vs.34.44±1.65，P＜0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:44.42±1.53vs.34.44±1.65，P＜0.05）。柚皮素小劑量組與pMCAO組和Vehicle組相比，梗塞體積有所減

10、小，但差異無統(tǒng)計學意義(pMCAOgroupvs.NG-Lgroup:44.35±2.23vs.38.99±2.54,P＞0.05;Vehiclegroupvs.NG-Hgroup:44.42±1.53vs.38.99±2.54，P＞0.05）。
　　 4在腦梗塞后24h，柚皮素大劑量組NOD2、RIP2、NF-κB和MMP-9表達均降低，而claudin-5的表達增加(P＜0.05)。柚皮素小劑量組也可以下調NOD2、RIP2