清熱化瘀Ⅱ號(hào)方對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究清熱化瘀Ⅱ號(hào)方對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響，探討其減輕缺血再灌注損傷的作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用清熱化瘀Ⅱ號(hào)方治療急性缺血性中風(fēng)提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：成年健康Sprague-Dawley(SD)大鼠110只，雌雄各半，隨機(jī)分為空白組（5只）、假手術(shù)組（5只）、模型組（50只）、治療組（50只），模型組、治療組按缺血2h后再灌注3h、6h、12h、24h、48h分為5個(gè)亞組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)10

2、只大鼠。采用灌胃法（ig）,每天二次，上午8～9點(diǎn)，下午3～4點(diǎn)各1次。連續(xù)預(yù)處理給藥三天，最后一次于術(shù)前1h給予，術(shù)后繼續(xù)灌胃用藥，直至全部處死動(dòng)物。治療組灌胃清熱化瘀Ⅱ號(hào)方,劑量為1.6ml/100g；空白組、假手術(shù)組和模型組分別灌胃與治療組等量生理鹽水；參照Longa等線栓法，并加以改進(jìn)，制作急性大腦中動(dòng)脈缺血再灌注損傷模型。保持大鼠局灶性腦缺血2h后進(jìn)行再灌注，分別再灌注3h、6h、12h、24h、48h進(jìn)行觀察，采用Longa

3、評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，合格者進(jìn)入下一步操作，注意隨時(shí)補(bǔ)充因不合格或死亡淘汰的大鼠，確保每組10只。測(cè)定各組實(shí)驗(yàn)大鼠腦組織含水量，觀察其病理學(xué)形態(tài)變化及運(yùn)用免疫組化的方法檢測(cè)MMP-2、MMP-9的陽(yáng)性表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.各組腦組織含水量比較：模型組與假手術(shù)組比較，在各時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量均明顯升高(P<0.05)；治療組與模型組比較，在各時(shí)間點(diǎn)腦組織含水量均明顯降低(P<0.05)，但高于假手術(shù)組(P<0.05)；空白組和假手術(shù)組相比，腦

4、組織含水量未見(jiàn)明顯增加(P＞0.05)。
　　2.運(yùn)用HE染色各組大鼠腦組織切片進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察:假手術(shù)組和空白組細(xì)胞結(jié)構(gòu)基本正常；模型組大腦皮質(zhì)層和海馬區(qū)結(jié)構(gòu)完整性破壞，神經(jīng)細(xì)胞間隙增寬，神經(jīng)細(xì)胞不清甚至缺失，胞漿變紅，核仁破壞、甚至核固縮或消失。治療組大鼠皮質(zhì)及海馬區(qū)也可見(jiàn)神經(jīng)元變性，核仁破壞，也有核固縮或消失現(xiàn)象，但神經(jīng)元變性的數(shù)量明顯少于模型組。
　　3.免疫組化法處理腦組織切片觀察MMP-2、MMP-9的陽(yáng)性細(xì)胞

5、數(shù):
　　(1)假手術(shù)組可見(jiàn)少量MMP-2、MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)表達(dá)，模型組和治療組在各時(shí)間點(diǎn)均可見(jiàn)明顯增多的MMP-9和MMP-2的陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)；
　　(2)MMP-9陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)在缺血再灌注3h、6h有少量表達(dá)，再灌注12h開(kāi)始顯著增加，再灌注24h、48h繼續(xù)明顯增加；治療組與模型組比較，在各時(shí)間點(diǎn)MMP-9陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05)，但高于假手術(shù)組(P<0.05)；
　　(3)MMP-2陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞

6、數(shù)在缺血再灌注3h、6h、12h有少量表達(dá)，再灌注24h開(kāi)始明顯增加，再灌注48h繼續(xù)顯著增加；治療組與模型組比較，在各時(shí)間點(diǎn)MMP-2陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)均減少(P<0.05)，但高于假手術(shù)組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.清熱化瘀Ⅱ號(hào)方能降低腦組織含水量，改善缺血區(qū)的病理組織學(xué)變化,具有減輕腦水腫的作用；
　　2.清熱化瘀Ⅱ號(hào)方能明顯降低MMP-2、MMP-9的表達(dá)，具有抗腦缺血再灌注損傷的作用，其機(jī)理可能是清熱