Fractalkine對人單核細胞MMP-2和MMP-9表達的影響.pdf

1、目的：細胞因子尤其是趨化因子吸引單核巨噬細胞等進入腎小球系膜區(qū)和腎小管間質是始動糖尿病腎病(diabetic nephropathy,DN)的早期事件，而基質金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)和基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9，MMP-9)是重要的細胞外基質(extraeellular matrix，ECM)降解酶，主要參與Ⅳ型膠原的降解，與DN的關系

2、非常密切。趨化因子能否影響單核巨噬細胞MMP-2和MMP-9的產生進而參與DN的發(fā)病機制值得研究。因此，本研究旨在觀察既有趨化作用又有粘附作用的Fractalkine(CX3CL1，Fkn)對人單核細胞株U937細胞MMP-2和MMP-9表達的影響，從而探討其在DN發(fā)病機制中的可能作用。
　　 方法：1、人重組Fkn干預U937細胞：使用不同濃度(0.3mg/L、0.6mg/L)的人重組Fkn干預U937細胞24h，收集細胞RT

3、-PCR法檢測MMP-2和MMP-9的基因表達，明膠酶譜法檢測細胞上清中MMP-2和MMP-9的水平；2、人腎系膜細胞(human renal mesangial cell，HRMC)上清及Fkn中和抗體干預U937細胞：實驗分為三組，分別為空白對照組、HRMC上清干預組和HRMC上清加Fkn中和抗體干預組，孵育24h后，收集細胞RT-PCR法檢測MMP-2和MMP-9的基因表達，明膠酶譜法檢測細胞上清中MM-2和MMP-9的水平。

4、r>　　 結果：1、不同濃度人重組Fkn干預U937細胞：0.3mg/L Fkn干預組(0.48±0.08)和0.6mg/LFkn干預組(0.43±0.09)MMP-2基因表達量都明顯低于空白對照組(0.68±0.21)(P＜0.01)；0.3mg/L Fkn干預組(1.15±0.18)和0.6mg/L Fkn干預組(1.01±0.13)MMP-2的酶解量明顯低于空白對照組(1.37±0.15)(P＜0.05；P＜0.01)；0.3m

5、g/L Fkn干預組(0.84±0.08)和0.6mg/L Fkn干預組(0.73±0.11)MMP-9基因表達量明顯低于空白對照組(1.01±0.26)(P＜0.05；P＜0.01)；0.3mg/L Fkn干預組(1.27±0.21)和0.6mg/L Fkn干預組(1.13±0.15)MMP-9的酶解量明顯低于空白對照組(1.45±0.15)(P＜0.05；P＜0.01)。2、HRMC上清及Fkn中和抗體干預U937細胞：HRMC上清

6、干預組(0.68±0.11)MMP-2基因表達量明顯低于空白對照組(0.92±0.25)(P＜0.01)，而HRMC上清加Fkn中和抗體干預組(0.86±0.12)明顯高于單用HRMC上清干預組(0.68±0.11)(P<0.05)；HRMC上清加Fkn中和抗體干預組(1.37±0.23)MMP-2的酶解量明顯高于單用HRMC上清干預組(1.12±0.15)(P<0.05)；HRMC上清干預組(0.37±0.11)MMP-9基因表達量明

7、顯低于空白對照組(0.66±0.04)(P＜0.01)，而HRMC上清加Fkn中和抗體干預組(0.54±0.03)明顯高于單用HRMC上清干預組(0.37±0.11)(P＜0.01)；HRC上清加Fkn中和抗體干預組(1.25±0.09)MMP-9的酶解量明顯高于單用HRMC上清干預(0.93±0.07)(P＜0.05)。
　　 結論：人重組Fkn可抑制U937細胞MMP-2和MMP-9的基因表達與分泌，而HRMC分泌的Fkn亦