纈沙坦對新生大鼠急性高氧性肺損傷中MMP-2和MMP-9表達(dá)的影響.pdf

1、目的 1、建立新生大鼠高氧性肺損傷的模型；2、觀察高氧性肺損傷急性、亞急性期肺組織中基質(zhì)金屬蛋白酶-2，9(matrix metalloproteinases，MMP-2,9)的表達(dá)量和活性的變化，探討其在基質(zhì)損傷和重建中的作用；3、探討給予1型血管緊張素受體拮抗劑纈沙坦，對高氧性肺損傷的保護(hù)作用和MMP-2,9表達(dá)的影響，為臨床防治高氧性肺損傷提供依據(jù)。 方法： 72只3～5天的新生Sprague Dawley

2、(SD)大鼠隨機(jī)分成3組：Ⅰ空氣組；Ⅱ高氧+生理鹽水(高氧組)；Ⅲ高氧+纈沙坦 (治療組)，各24只。再按實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)3，7天分二個亞組12只；每個亞組分灌洗組和非灌洗組，各6只。將Ⅱ、Ⅲ組放于氧箱中，保持箱內(nèi)氧氣濃度為90％～95％，Ⅰ組置于空氣中；Ⅲ組自實(shí)驗(yàn)次日起每日同一時間灌入纈沙坦30mg／kg；Ⅱ組灌入等量的生理鹽水。每組分為①肺泡灌洗組和②非肺泡灌洗組兩個亞組。灌洗組在各時間點(diǎn)麻醉動物行支氣管肺泡灌洗，測定灌洗液中MMP-2，

3、9表達(dá)活性；非灌洗組各時間點(diǎn)處死動物，取左肺行免疫組織化學(xué)結(jié)合顯微圖像分析檢測MMP-2，9表達(dá)半定量分析；右肺100mg制肺組織勻漿，檢測總蛋白和丙二醛(MDA)，余下右肺組織稱量后置于烤箱中測肺濕/干重比。 結(jié)果： 1．高氧下3天新生大鼠精神反應(yīng)差，7天后體重增長不明顯，呼吸急促，活動遲緩。 2．肺組織病理切片：高氧組3天時肺泡腔內(nèi)有明顯出血和炎性細(xì)胞滲出，7天時損傷加重，肺間隔增寬，肺組織結(jié)構(gòu)紊亂。纈沙坦治

4、療組炎癥改變有減輕，肺間隔增寬不明顯。 3．肺濕/干重比：實(shí)驗(yàn)3天，高氧組較空氣組增高；7天時，高氧組明顯高于空氣組(p<0.01)，而纈沙坦治療組與高氧組相比，該比值有明顯下降。 4．肺組織勻漿總蛋白(Total Potem，TP)含量檢測：實(shí)驗(yàn)3天，高氧組TP含量已高于空氣組；7天時，高氧組TP含量持續(xù)增高；纈沙坦治療組與高氧組相比，實(shí)驗(yàn)3天、7天均明顯下降。 5．肺組織勻漿丙二醛(MDA)含量測定：實(shí)驗(yàn)3天

5、時，高氧組MDA高于空氣中(p<0.01)，隨高氧暴露的持續(xù)，繼續(xù)增高；纈沙坦治療組與高氧組相比，3天和7天MDA含量明顯下降(p<0.01)。 6．肺組織MMP-2,9表達(dá)(免疫組化)：正?？諝饨M肺組織中MMP-2和MMP-9均僅有較弱的表達(dá)。高氧暴露后，MMP-2表達(dá)明顯增多、增強(qiáng)，3、7天與相應(yīng)時間點(diǎn)空氣組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)；但MMP-9表達(dá)在高氧后7天始有明顯增強(qiáng)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。纈沙坦治療3天MMP-2和M

6、MP-19表達(dá)均無明顯變化，治療7天才明顯抑制兩酶的表達(dá)強(qiáng)度，與相應(yīng)時間點(diǎn)高氧組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 7．肺泡灌洗液中MMP-2,-9活性(酶譜學(xué)分析)：空氣組MMP-2和MMP-9活性極低。高氧3天，MMP-2活性明顯增強(qiáng)，與空氣組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，MMP-9活性增高不明顯；高氧7天時MMP-2和MMP-9活性均有明顯增強(qiáng)。纈沙坦治療3天對MMP-2和MMP-9的抑制不明顯，治療7天可抑制兩者的異常表達(dá)，且有統(tǒng)

7、計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。 結(jié)論： 1、長期的高濃度吸氧可導(dǎo)致新生大鼠的急性肺損傷，病理表現(xiàn)為肺組織局部充血和出血、炎癥滲出、肺泡數(shù)目減少和結(jié)構(gòu)組織紊亂： 2、MMP-2和MMP-9在新生大鼠急性高氧性肺損傷時有高表達(dá)，提示其在該疾病的發(fā)展過程中有重要作用； 3、MMP-2在新生大鼠急性肺損傷時的變化較MMP-9迅速而敏感，提示前者的致?lián)p傷作用較強(qiáng)； 4、血管緊張素受體拮抗劑(纈沙坦)通過抑制MM