MMP-2對(duì)人腎系膜細(xì)胞Fractalkine釋放的影響.pdf

1、目的：業(yè)已明確，糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation end products，AGEs)是糖尿病腎病(diabetic nephropathy，DN)的主要致病因子之一。本研究組既往在培養(yǎng)的人腎系膜細(xì)胞觀察到AGEs可增加fractalkine(Fkn)而減少基質(zhì)金屬蛋白酶2(matrix metalloproteinase-2，MMP-2)基因和蛋白質(zhì)表達(dá)。AGEs是否會(huì)通過(guò)Fkn和MMP-2交互作用介導(dǎo)其致病效應(yīng)將是

2、值得研究的課題。本研究用重組MMP-2干預(yù)體外培養(yǎng)的人腎系膜細(xì)胞(human renalmesangial cells，HRMC)，觀察其對(duì)HRMC Fkn表達(dá)和釋放的影響。
　　 方法：在體外培養(yǎng)HRMC，換用無(wú)血清的DMEM同步化饑餓24h后，用重組MMP-2和/或AGE-BSA干預(yù)HRMC。用Transwell小室裝置檢測(cè)趨化單核細(xì)胞的功能，用共培養(yǎng)和熒光法檢測(cè)粘附單核細(xì)胞的功能；用RT-PCR檢測(cè)Fkn mRNA的表達(dá)，

3、ELISA法檢測(cè)HRMC上清液中Fkn蛋白含量，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞膜Fkn蛋白水平。
　　 結(jié)果：1.MMP-2組HRMC趨化單核細(xì)胞數(shù)顯著高于空白對(duì)照組（50.73+-11.37vs23.20+-8.26，P<0.01）。2.MMP-2組HRMC粘附單核細(xì)胞數(shù)顯著低于空白對(duì)照組（1.52+-1.24vs3.00+-1.46，P<0.01）。3.MMP-2干預(yù)后免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)細(xì)胞膜Fkn蛋白水平明顯下降。4.AGE-BSA組

4、（1.40+-0.07）Fkn mRNA的表達(dá)明顯高于BSA組(1.10+-0.50)和DMEM組(0.72+-0.14)，而MMP-2干預(yù)HRMC后Fkn mRNA的表達(dá)與相應(yīng)對(duì)照組無(wú)明顯差異：DMEM組{MMP-2(10ng.ml-1)，1.11+-0.20;MMP-2(40ng-ml-1)，0.81+-0.27).BSA(200mg·L-1)組{MMP-2(10ng-ml-1),1.00+-0.12;MMP-2(40ng·ml-1

5、),0.96+-0.04）。AGE-BSA(200mg-L)組{MMP-2(10ng·ml-1),0.86+-0.07;MMP-2(40ng.ml-1),0.79+-0.11）。5.AGE-BSA（1055.46+-26.24pg.ml-1）干預(yù)HRMC后上清液中Fkn的濃度明顯高于BSA（364.33+-9.15pg.ml4-，P<0.01）和DMEM（236.42+-16.25pg·ml-1,P<0.01）組，MMP-2干預(yù)HRMC

6、后上清液中Fkn的濃度均顯著低于相應(yīng)對(duì)照組，且呈濃度依賴關(guān)系：DMEM組不同MMP-2濃度干預(yù){0.625ng·ml1-，204.31+-6.54pg-ml-1；1.25 ng-ml-1,162.89+-4.68pg·ml-1；2.5ng·ml-1,105.59+-4.67pg·ml-1;5.0 ng.ml-1,50.22+-2.94pg·ml-1,P<0.01}。BSA(200mg·L-l)組不同的MMP-2濃度干預(yù){0.625ng·

7、ml-1,252.67+-7.48pg-ml-1;1.25ng.ml-1,197.32+-4.73pg·ml-1;2.5ng·ml-1,134.58+-12.13pg·ml-1;5.0ng·ml-1,67.72+-6.58pg·ml-1,P<0.01}。AGE-BSA(200mg·L-1)組不同的MMP-2濃度干預(yù){0.625ng.ml-1,788.33+-10.81pg-ml-1;1.25ng-ml-1,682.52+-10.67pg

8、-ml-1,2.5 ng`ml-1,534.88+-7.51pg-ml-1;5.0ng-m1-1,326.65+-4.70g·ml-1,P<0.01).
　　 結(jié)論:1、AGE-BSA可增加HRMC Fkn的mRNA表達(dá)和蛋白分泌，提示AGEs可能部分通過(guò)Fkn途徑參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展；2、MMP-2可增強(qiáng)HRMC趨化單核細(xì)胞功能，降低HRMC粘附單核細(xì)胞的功能：MMP-2對(duì)Fkn mRNA的表達(dá)無(wú)明顯影響，但促進(jìn)HRMC