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1、目的:本實(shí)驗(yàn)采用人真皮成纖維細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?研究神經(jīng)鞘氨醇磷酸膽堿(sphingosylphosphorylchoine,SPC)對(duì)人真皮成纖維細(xì)胞中基質(zhì)金屬蛋白酶-1(MMP-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶-3(MMP-3)表達(dá)的影響,探討SPC促進(jìn)皮膚創(chuàng)傷愈合作用機(jī)制。
方法:采用組織塊消化法培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞,取4-10代進(jìn)行實(shí)驗(yàn),利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和免疫印跡(West
2、ern blotting)的方法半定量檢測(cè)經(jīng)SPC誘導(dǎo)的人真皮成纖維細(xì)胞中MMP-1、MMP-2、MMP-3 mRNA水平和蛋白水平的表達(dá)。
結(jié)果:采用組織塊消化法培養(yǎng)人真皮成纖維細(xì)胞,與傳統(tǒng)的消化法和組織法比較,成功率較高。SPC以時(shí)間梯度(2、6、12、24和48小時(shí))誘導(dǎo)人真皮成纖維細(xì)胞后,RT-PCR結(jié)果顯示,mRNA的表達(dá)水平產(chǎn)生了不同程度的變化,MMP-1、MMP-3在SPC作用2小時(shí)左右時(shí)逐漸升高,六小時(shí)左右
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