天花粉蛋白對IL-1β介導(dǎo)下的人牙周膜細(xì)胞MMP-1,MMP-2表達(dá)的影響.pdf

1、一直困擾正畸醫(yī)師的牙根吸收問題是正畸牙齒移動過程中的并發(fā)癥之一。目前一些研究表明，正畸過程中所發(fā)生的牙根吸收是無菌性炎癥反應(yīng)過程，而無菌性炎癥過程也是牙根吸收形成過程的一部分，所以將正畸所致牙根吸收稱為正畸無菌性炎性根吸收。正畸無菌性炎性根吸收幾乎在所有正畸治療的牙上都會發(fā)生，當(dāng)僅發(fā)生牙根表淺部位的吸收，一般都能通過自身修復(fù)。若吸收進(jìn)一步發(fā)展，將會出現(xiàn)不可逆的牙根變短，甚至造成牙松動、脫落，這對正畸患者來說是非常不利的。有研究顯示，大約

2、有1-5％經(jīng)正畸治療的牙，根尖部1/3完全被吸收。牙根吸收的具體原因及機(jī)制目前還不是很清楚，但有關(guān)牙根吸收的分子生物學(xué)機(jī)制方面的研究提示，牙根吸收過程與骨吸收相似，即無機(jī)質(zhì)的酸化脫礦，有機(jī)質(zhì)的降解。在有機(jī)質(zhì)的降解中膠原纖維的分解斷裂是關(guān)鍵的環(huán)節(jié)，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrix metalloproteinases，MMPs)和基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑(tissue inhibitors of metalloproteinases，TIMPs)

3、在牙周組織的膠原的改建中發(fā)揮重要的作用。在局部炎性因子刺激下，MMPs表達(dá)增多會促進(jìn)骨吸收。
　　目前臨床上主要通過避免使用過大矯治力來預(yù)防牙根吸收。當(dāng)正畸牙齒移動時，矯治力誘導(dǎo)牙周組織產(chǎn)生無菌性炎性因子，必然會導(dǎo)致MMPs表達(dá)增加。因此，抑制炎癥因子介導(dǎo)的牙周組織中基質(zhì)金屬蛋白酶表達(dá)增強，就成為對抗牙根吸收問題的可能途徑之一。
　　牙周膜細(xì)胞是正畸力的效應(yīng)細(xì)胞，可表達(dá)分泌MMPs。正畸無菌性炎性牙根吸收時，炎性因子表達(dá)增加

4、，刺激MMPs表達(dá)增高是引起膠原降解的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。天花粉蛋白（trichosanthin，TCS）具有抗腫瘤的作用，腫瘤細(xì)胞的浸潤及轉(zhuǎn)移與MMPs有關(guān)，這提示TCS可能在對抗MMPs的分泌表達(dá)上有一定的作用。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，TCS對TNF-α和IL-6介導(dǎo)的人牙周膜成纖維細(xì)胞中MMP-1表達(dá)增高的狀況的有抑制作用。
　　本研究擬探討下列問題：①炎性因子IL-1β對人牙周膜細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶-1,2(matrix metallop

5、roteinase-1,2, MMP-1,2)表達(dá)的影響，以分析發(fā)生牙根吸收過程中，組織中牙根吸收相關(guān)因子表達(dá)增高的機(jī)制；②天花粉蛋白對炎性因子IL-1β介導(dǎo)下人牙周膜細(xì)胞MMP-1,2表達(dá)的影響，以分析天花粉蛋白是否能抑制牙根吸收相關(guān)因子的表達(dá)情況，是否有抑制牙根吸收的可能性。
　　一、研究內(nèi)容與方法：
　?。ㄒ唬┭仔砸蜃覫L-1β對人牙周膜細(xì)胞MMP-1,2表達(dá)的影響研究
　　用IL-1β作用于體外培養(yǎng)的人牙周膜細(xì)

6、胞（human periodontal ligament cells，hPDLCs），通過噻唑藍(lán)比色法（MTT）方法，觀察IL-1β對hPDLCs生長狀態(tài)影響，用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）、免疫印跡法（Western-blot）檢測MMP-1 mRNA及蛋白表達(dá)情況；用RT-PCR檢測MMP-2 mRNA表達(dá)情況。
　　（二

7、）TCS作用于IL-1β介導(dǎo)狀態(tài)下的hPDLCs，觀察hPDLCs生長狀態(tài)及牙根吸收相關(guān)物質(zhì)MMP-1,2表達(dá)的變化情況
　　通過MTT方法，觀察天花粉蛋白對hPDLCs生長狀態(tài)影響情況。用RT-PCR、Western-blot實驗檢測MMP-1基因及蛋白水平表達(dá)情況。用RT-PCR及明膠酶譜實驗檢測MMP-2基因及蛋白活性表達(dá)情況。
　　二、研究結(jié)果與結(jié)論
　　結(jié)果：
　?。ㄒ唬㊣L-1β介導(dǎo)下hPDLCs的增

8、殖狀況無明顯改變（P>0.05）；IL-1β介導(dǎo)下hPDLCs中MMP-1 mRNA及其所分泌的MMP-1蛋白表達(dá)均呈上升趨勢；MMP-2 mRNA表達(dá)也呈上升趨勢。
　?。ǘ㏕CS作用于IL-1β介導(dǎo)狀態(tài)下的hPDLCs，觀察hPDLCs生長狀態(tài)及牙根吸收相關(guān)物質(zhì)MMP-1,2表達(dá)的變化結(jié)果：
　?、旁赥CS單獨或與IL-1β復(fù)合作用下，hPDLCs的增殖狀況無明顯改變（P>0.05）；
　?、芓CS作用于IL-1