天花粉蛋白應(yīng)用于喉癌化療及機(jī)制的研究.pdf

1、復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文天花粉蛋應(yīng)用于喉癌細(xì)胞化療及機(jī)制的研究復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文天花粉蛋白應(yīng)用于喉癌化療及機(jī)制的研究StudyontheChemotherapyofLaryngealSquamousCarcinomabyTrichsanthin研究方向：耳鼻咽喉頭頸外科碩士研究生：張鐸導(dǎo)師：陶磊副教授導(dǎo)師組成員：路麗明副研究員程磊副主任醫(yī)師張明副主任醫(yī)師復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院二。一三年四月復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文天花粉蛋應(yīng)用于喉癌細(xì)胞化療

2、及機(jī)制的研究天花粉蛋白應(yīng)用于喉癌細(xì)胞化療及機(jī)制的研究摘要目的：研究天花粉蛋白(trichosanthin，TCS)單獨(dú)或聯(lián)合順鉑用于對喉癌(HEp。2細(xì)胞株和AMCFIN一8細(xì)胞株)增殖抑制，以及研究TCS激活的JNK／MAPK信號通路與其發(fā)揮藥理作用之間的關(guān)系。方法：設(shè)立不同的實驗組，包括不同濃度TCS組(1、5、9、1399／m1)，低濃度順鉑組(3gg／m1)、高濃度順鉑組(10gg／m1)、及TCS和順鉑聯(lián)合作用組(5pg／ml

3、TCS和3gg／ml順鉑)，陰性對照組；連續(xù)5天使用CCK8法(cellcountingkit一8，CCK8)和乳酸脫氫酶法檢測不同實驗組對喉癌細(xì)胞的抑制作用和細(xì)胞毒性；流式細(xì)胞儀和Hochest33258染色觀察細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期：Westernblot檢測JNK／MAPK，磷酸化JNK／MAPK、核因子KB(nuclearfactorKB，NFvd3)、p38、磷酸化p38、I—vB及磷酸化I1(B的變化。結(jié)果：TCS通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋

4、亡和細(xì)胞周期停滯的方式來抑制喉癌細(xì)胞增殖，TCS通過時間和濃度依賴的方式激活JNK／MAPK信號通路，從蛋白水平上阻斷JNK／MAPK信號通路，TCS對喉癌細(xì)胞的增殖抑制作用和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用減弱，與TCS和低劑量順鉑單獨(dú)作用相比，TCS和順鉑聯(lián)合作用可明顯抑制喉癌細(xì)胞的生長(PO05)，而毒性低于高濃度順鉑組(P001)；Westernblot顯示順鉑增強(qiáng)NF—KB轉(zhuǎn)錄因子活性，抑制JNK信號通路，TCS組主要激活JNK／MAPK信

5、號通路而抑制NFKB，TCS和順鉑聯(lián)合作用后磷酸化JNK保持高水平抑制NF—KB活性。結(jié)論：TCS通過激活JNK／MAPK信號通路，發(fā)揮其抑制喉癌細(xì)胞增殖作用，同時抑制NF—KB轉(zhuǎn)錄因子活性，增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞凋亡比例，從而降低其對細(xì)胞的毒性并增強(qiáng)其抗腫瘤療效，為中藥天花粉蛋白聯(lián)合順鉑應(yīng)用于喉癌臨床治療奠定了實驗基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：天花粉蛋白：喉癌細(xì)胞株；凋亡；JNK／MAPK；順鉑；NF一1(B注：本課題為國家自然科學(xué)青年基金(30801