篩選高效低毒天花粉蛋白衍生肽誘導同種異體移植耐受的研究.pdf

1、天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）是從植物括簍根塊中提取的堿性蛋白，我們前期的研究首次發(fā)現(xiàn)其具有免疫負向調(diào)節(jié)功能，可抑制Th1型主宰的細胞應答，是一種潛在的免疫抑制劑。然而Tk在臨床使用時伴隨一定的肌肉和神經(jīng)毒性，因此明確 Tk分子的構效關系顯得尤為重要。為此，我們對Tk進行了分段克隆和表位分析，篩選獲得低毒高效的衍生肽Tk-PQ，并分析其誘導同種異體移植耐受的作用及機制，為其應用臨床奠定實驗基礎。我們在體外建立同種異體 M

2、LR體系，體內(nèi)構建小鼠同種異體皮膚移植模型，3H-TdR摻入法檢測發(fā)現(xiàn)Tk-PQ對MLR具有顯著抑制效果，抑制率達87％（P＜0.01）；乳酸脫氫酶（LDH）及Annexin-V/PI檢測法證明Tk-PQ對細胞毒性作用與對照組相比無顯著性差異。皮膚移植實驗表明，Tk-PQ治療后，小鼠同種異體皮膚移植物的生存期平均由8.4天延長至22.6天（P＜0.01）；HE染色顯示，治療組移植皮膚局部炎性浸潤減輕。采用real-time PCR、EL

3、ISA、FACS等方法分析發(fā)現(xiàn)，Tk-PQ可顯著上調(diào)CD4+CD25+Foxp3+T細胞（nTreg）比例，細胞因子IL-10、TGF-β分泌水平升高，IL-2、IFN-γ、IL-17A分泌水平降低。Western blotting和co-IP結果顯示，Tk-PQ可增強IRF4表達水平；此外，Western blotting和real-time PCR結果提示Tk-PQ可通過抑制I-κB磷酸化阻止NF-κB的活化入核，從而抑制NF-κB

4、下游炎癥因子TNF-α、IL-1β、IL-6的表達。由此得出以下結論，篩選出的Tk衍生肽—Tk-PQ對Th1/Th17型主宰的免疫應答具有明顯免疫抑制作用，抑制效果優(yōu)于全長蛋白而細胞毒性低于Tk；體內(nèi)功能實驗結果發(fā)現(xiàn)其能顯著延長小鼠同種異體移植皮膚的生存期，其中可能涉及的作用機制包括：上調(diào)CD4+CD25+Foxp3+T細胞比例及細胞因子IL-10、TGF-β分泌，下調(diào)IFN-γ、IL-17A等的表達水平，增強 IRF4乙酰化水平，抑制