天花粉蛋白與核糖體蛋白L10a及細胞質膜蛋白的結合研究.pdf

1、天花粉蛋白是一種Ⅰ型核糖體失活蛋白，具有多種生物學活性。本文用天花粉蛋白親和層析柱分離到一個結合蛋白，通過質譜鑒定為核糖體蛋白L10a。體外結合實驗證實重組的核糖體蛋白L10a能夠與天花粉蛋白特異的結合。表面等離子共振實驗顯示天花粉蛋白與核糖體蛋白L10a之間具有較高的親和性：解離平衡常數(shù)為7.78nM。天花粉蛋白突變體的研究進一步表明這種特異結合與天花粉蛋白的核糖體失活活性相關。這一發(fā)現(xiàn)對于理解天花粉蛋白失活核糖體以及其發(fā)揮生物學活性

2、的機制提供了新的思路。 天花粉蛋白用于中期流產具有很高的成功率(94﹪)和很低的副作用。這種流產作用可能是通過天花粉蛋白直接和特異的損傷人胎盤合胞體滋養(yǎng)層細胞而進行的。MTT實驗顯示人絨毛膜癌細胞對天花粉蛋白具有極高的敏感性，同時天花粉蛋白能夠誘導人絨毛膜癌細胞胞內鈣離子濃度波動和凋亡。放射配體結合實驗顯示天花粉蛋白與人絨毛膜癌細胞的結合具有明顯的飽和性，表現(xiàn)為雙位點結合特性：一個高親和性結合位點(Bmax1=10，351±24

3、00sites/cell，Kd1=0.2358±0.1nmol/L)和一個低親和性結合位點(Bmax2=102，037±31，500sites/cell，Kd2=10.41±3nmol/L)。流式細胞儀也證實了這種特異結合。使用生物素標記人絨毛膜癌細胞的表面蛋白，通過固定化的親和素親和純化增溶的生物素化的膜蛋白以及天花粉蛋白親和膠體pull-down實驗鑒定到兩個天花粉蛋白結合蛋白(50kDa，60kDa)，這兩個蛋白顯示出具有與Con