天花粉蛋白通過調(diào)控miR-4455影響宮頸癌Hela細胞侵襲、遷移的實驗研究.pdf

1、目的：本實驗以宮頸癌Hela細胞為研究對象，分析天花粉蛋白(TCS)處理前后Hela細胞中miRNA表達譜的變化情況。探索TCS處理Hela細胞后miR-4455表達上調(diào)的機制以及對細胞遷移和侵襲的影響。
　　方法：⑴TCS處理人宮頸癌Hela細胞后，基因芯片技術分析藥物處理前后Hela細胞中miRNA表達譜的變化情況。⑵實時定量PCR技術驗證TCS對miR-4455表達的影響是否與芯片結(jié)果一致。⑶克隆miR-4455啟動子并用報

2、告基因技術驗證其活性。⑷硫化測序PCR技術驗證TCS處理Hela細胞后對miR-4455甲基化狀態(tài)的影響。⑸Transwell實驗檢測高表達miR-4455對宮頸癌Hela細胞遷移和侵襲能力的影響。⑹Western blot檢測高表達miR-4455對上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)相關標志蛋白E-cad的影響。
　　結(jié)果：①利用miRNA芯片技術成功篩選出TCS處理前后差異表達的miRNAs，其中有10個miRNA表達下調(diào)，15個表達上調(diào)

3、。②實時定量PCR驗證了miR-4455表達上調(diào)與芯片結(jié)果相一致。③報告基因分析發(fā)現(xiàn)miR-4455上游1896bp片段中含有一個較弱的啟動子。④硫化測序PCR分析發(fā)現(xiàn)TCS處理宮頸癌Hela細胞后對miR-4455啟動子有去甲基化作用。⑤Transwell實驗結(jié)果提示高表達miR-4455能在一定程度抑制宮頸癌Hela細胞遷移和侵襲能力。⑥Western blot結(jié)果表明高表達miR-4455增加了EMT相關上皮標志蛋白E-cad的表