依那西普對(duì)大鼠缺血再灌注后腦組織中MMP-9、ClaudiN-5表達(dá)的影響.pdf

1、目的:觀察重組人Ⅱ型腫瘤壞死因子受體抗體融合蛋白-依那西普(ETN)對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損評(píng)分、腦含水量以及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)、Claudin-5和腫瘤壞死因子(TNF-α)表達(dá)的影響，探討缺血再灌注損傷后TNF-α拮抗劑對(duì)腦的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制，為其臨床治療腦缺血再灌注損傷提供依據(jù)。
　　方法:采用線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈腦缺血再灌注模型。選用250-300g健康清潔級(jí)雄性SD大鼠160只

2、，隨機(jī)分為以下各組:正常組(n=10)、假手術(shù)組（sham組）(n=30)、缺血再灌注模型組（I/R組）(n=30)和依那西普治療組（ETN組），ETN組再按劑量不同分為:低劑量組(n=30):ETN0.2mg/kg;中劑量組(n=30):ETN0.4mg/kg;高劑量組(n=30):ETN0.8mg/kg。除正常組外其余各組大鼠按處死時(shí)間不同隨機(jī)分為缺血2h再灌注1d、2d、5d3個(gè)亞組。ETN組在再灌注4h予以不同劑量ETN進(jìn)行干預(yù)

3、（右側(cè)側(cè)腦室注射），假手術(shù)組和模型組予以相同劑量的無(wú)菌生理鹽水干預(yù)，建模后至處死前，對(duì)大鼠進(jìn)行動(dòng)態(tài)神經(jīng)功能缺損評(píng)分，采用HE染色法觀察病理組織學(xué)變化;干濕重法測(cè)量腦含水量;應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)MMP-9、Claudin-5及TNF-α蛋白表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，用SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:
　　1、SD大鼠腦缺血再灌注模型制作成功率為83.77％，死亡率為5.76％。
　　2、正常對(duì)照組和假手術(shù)組大鼠無(wú)神

4、經(jīng)功能缺損癥狀，模型組和ETN組均有不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀，相同時(shí)間點(diǎn)ETN治療組與模型組相比，ETN治療組神經(jīng)功能缺損癥狀減輕，神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示ETN能改善神經(jīng)功能缺損癥狀。
　　3、干濕重法結(jié)果顯示，再灌注1d時(shí)大鼠的腦組織含水量顯著增加，2d時(shí)達(dá)到高峰，再灌注5d后含水量下降，但仍高于假手術(shù)組。ETN能顯著減少大鼠腦組織含水量，以中、高劑量組最明顯，中、高劑量組組間無(wú)顯著性差異。
　　4、正常組

5、和假手術(shù)組SD大鼠大腦皮層組織形態(tài)結(jié)構(gòu)沒(méi)有明顯變化;模型組根據(jù)時(shí)間點(diǎn)不同可見(jiàn)膠質(zhì)細(xì)胞增生，細(xì)胞水腫，神經(jīng)細(xì)胞壞死。ETN能減少缺血灶腦組織炎癥反應(yīng)，減輕腦水腫，以中、高劑量組明顯。
　　5、正常組未見(jiàn)明顯MMP-9免疫陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá),假手術(shù)組偶見(jiàn)MMP-9陽(yáng)性表達(dá)，模型組缺血側(cè)MMP-9于再灌注1d時(shí)開(kāi)始升高，2d時(shí)達(dá)高峰，第5d時(shí)表達(dá)下降，但仍高于假手術(shù)組，ETN組MMP-9表達(dá)變化趨勢(shì)與模型組相同，但表達(dá)水平均低于模型組。同時(shí)間

6、點(diǎn)各ETN組間比較，中、高劑量組MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中、高劑量組組間無(wú)顯著性差異。
　　6、局灶性腦缺血再灌注1d時(shí)大鼠腦組織Claudin-5蛋白水平顯著降低，再灌注2d組降低最明顯，再灌注5d組表達(dá)增加。ETN治療組各組大鼠腦組織Claudin-5蛋白表達(dá)水平增加，以中、高劑量組增加的更明顯，中、高劑量組組間無(wú)顯著性差異。
　　7、模型組缺血側(cè)TNF-α于再灌注1d時(shí)達(dá)高峰，2d及5d表達(dá)下降

7、，但仍高于假手術(shù)組，ETN組TNF-α表達(dá)變化趨勢(shì)與模型組相同，但表達(dá)水平均低于模型組。同時(shí)間點(diǎn)各ETN組間比較，中、高劑量組TNF-α陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目最少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，中、高劑量組組間無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)論:
　　1、依那西普對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷有神經(jīng)保護(hù)作用，其保護(hù)作用呈劑量相關(guān)性。
　　2、通過(guò)減少M(fèi)MP-9的表達(dá)和增加Claudin-5的表達(dá)而維持血腦屏障的完整性可能是依那西普發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)