阻斷信號(hào)傳導(dǎo)對(duì)延長(zhǎng)小鼠同種異體移植心臟存活時(shí)間的影響.pdf

1、第一部分 用腺相關(guān)病毒載體轉(zhuǎn)染CTLA4Ig基因延長(zhǎng) 小鼠同種異體移植心臟存活時(shí)間 目的評(píng)估用冠狀動(dòng)脈灌注轉(zhuǎn)染rAAV-CTLA4Ig基因的轉(zhuǎn)染效率和對(duì)延長(zhǎng)小鼠同種異體移植心臟存活時(shí)間的作用。方法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為治療組、對(duì)照組和非治療組。建立小鼠心臟移植模型，治療組小鼠(B10，H2b)在進(jìn)行同種異體小鼠心臟移植時(shí)經(jīng)冠狀動(dòng)脈灌注轉(zhuǎn)染治療基因rAAV-CTLA4Ig；對(duì)照組灌注報(bào)告基因rAAV-LacZ；非治療組灌

2、注磷酸緩沖液(PBS)。取rAAV-LacZ作為顯色報(bào)告基因。其β半乳糖的表達(dá)用X-gal染色顯示，測(cè)定基因轉(zhuǎn)染效率和植入C3H(H2k)體內(nèi)的同種異體B10(H2b)心臟的存活時(shí)間。結(jié)果灌注rAAV-LacZ后4-6周，30﹪-40﹪的心肌細(xì)胞X-gal染色呈強(qiáng)陽性；額外應(yīng)用血管擴(kuò)張藥物并不提高轉(zhuǎn)染率；轉(zhuǎn)染rAAV-CTLA4Ig基因明顯延長(zhǎng)同種異體的B10移植心臟在受體C3H小鼠體內(nèi)的存活時(shí)間。結(jié)論通過冠狀動(dòng)脈灌注，rAAV載體能成

3、功地進(jìn)行小鼠心肌的基因轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染rAAV-CTLA4Ig可明顯抑制移植物的排斥反應(yīng)。 第二部分 核因子-kappaB反義核苷酸對(duì)小鼠移植心臟存活時(shí)間的影響目的NF-κB在調(diào)節(jié)樹突狀細(xì)胞(APC)上的協(xié)同刺激分子具有重要作用，我們使用特定的反義硫代寡聚脫氧核苷酸(ODN)來特異性地抑制小鼠核因子-kappaB(NF-κB)的mRNA，導(dǎo)致APC協(xié)同刺激分子表達(dá)不足，延長(zhǎng)同種異體移植心臟的存活時(shí)間。方法心臟移植術(shù)后緩釋滲透泵

4、被植入受體腹腔內(nèi)，通過泵全身給予對(duì)抗NF-kB-mRNA的ODN(簡(jiǎn)稱抗NF-κB-ODN)，對(duì)照組動(dòng)物通過緩釋泵給予錯(cuò)配(mismatch)ODN或不用藥。結(jié)果正常受體C3H小鼠排斥同種異體移植心臟的中位存活時(shí)間(MST)是15d；14天應(yīng)用12.5mg·kg·d抗NF-κB-ODN延長(zhǎng)了同種異體移植心臟存活時(shí)間，中位存活時(shí)間是25d(P＜0.05)；而用錯(cuò)配ODN對(duì)照組的中位存活時(shí)間是17d，與非用藥組比有顯著性，P＞0.05。為了

5、研究抗NF-κB-ODN免疫抑制作用的內(nèi)在機(jī)制，在移植手術(shù)后7天收集移植物浸潤(rùn)細(xì)胞、脾臟T細(xì)胞、血清。的用抗NF-κB-ODN治療受體小鼠的新鮮分離炎癥浸潤(rùn)細(xì)胞的供體特異性細(xì)胞毒活性明顯抑制，用抗NF-κB-ODN治療的受體脾T細(xì)胞的特異性細(xì)胞毒活性比非用藥組減弱。結(jié)論實(shí)驗(yàn)顯示，抗NF-κB-ODN治療可明顯抑制同種異體移植后受體的免疫反應(yīng)，使同種異體移植物的存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)。 第三部分 應(yīng)用抗CD80，CD86反義寡聚

6、脫氧核苷酸轉(zhuǎn)導(dǎo)樹突狀細(xì)胞 延長(zhǎng)小鼠同種異體移植心臟的存活時(shí)間 目的抗原遞呈細(xì)胞(antigen-presentingcell，APC)表達(dá)協(xié)同刺激分子，其對(duì)決定T細(xì)胞的免疫反應(yīng)起重要作用。我們研究了樹突狀細(xì)胞(DC)轉(zhuǎn)導(dǎo)了高親和力的針對(duì)CD80或CD86-mRNA的反義寡聚脫氧核苷酸(簡(jiǎn)稱抗CD80，CD86-mRNA-ODN)對(duì)DC表型和功能的影響。方法C57BL/10小鼠(B10，H2b)骨髓細(xì)胞在粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集

7、落刺激因子(granulocyte-macrophagecolonystimulatingfactor，GM-CSF)和白介素4(IL-4)的刺激下產(chǎn)生DC，轉(zhuǎn)導(dǎo)抗CD80，CD86-mRNA-ODN，堿基錯(cuò)配的反義ODN作為陰性對(duì)照，流式細(xì)胞儀檢測(cè)反義ODN對(duì)細(xì)胞表型的影響，體外混合淋巴反應(yīng)和細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒效應(yīng)檢測(cè)DC的功能，并檢測(cè)對(duì)同種異體移植的存活時(shí)間的影響。結(jié)果脂質(zhì)體可以提高ODN在DC的轉(zhuǎn)導(dǎo)；抗CD80，CD86-m