TRIB3基因沉默改善2型糖尿病大血管病變的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景：
　　 糖尿病的發(fā)病率逐年增高，在發(fā)達(dá)國(guó)家已被列為繼心血管疾病及腫瘤之后的第三大疾病。研究結(jié)果顯示，糖尿病患者的醫(yī)療服務(wù)使用是非糖尿病患者的3至4倍(包括門診和住院次數(shù))；糖尿病患者的醫(yī)療支出是同年齡、同性別無糖尿病患者的9倍。另一項(xiàng)研究顯示，我國(guó)糖尿病患者醫(yī)療花費(fèi)中，只有不到20％是用于控制血糖，超過80％的費(fèi)用是治療糖尿病引起的并發(fā)癥。目前糖尿病對(duì)人類健康危害最大的是在動(dòng)脈硬化及微血管病變基礎(chǔ)上產(chǎn)生的多種慢性并發(fā)癥

2、。糖尿病患者的血管病變發(fā)病率是非糖尿病患的2至4倍。現(xiàn)有研究證實(shí)，糖尿病血管病變的基本病理基礎(chǔ)為動(dòng)脈粥樣硬化及血管平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞大量增殖所致的動(dòng)脈中膜、外膜不規(guī)則增厚、纖維化和鈣化。UKPDS研究證實(shí)，嚴(yán)格控制血糖可以明顯降低糖尿病患者微血管病變的發(fā)生率。由此，奠定了糖尿病血管并發(fā)癥的防治基礎(chǔ)。然而，2008年相繼揭曉的三項(xiàng)重要強(qiáng)化降糖試驗(yàn)(ACCORD、ADVANCE及VADT)顯示，積極控制血糖可以降低糖尿病患者微血管病變的

3、發(fā)生率，但卻未能證實(shí)強(qiáng)化降糖治療可降低2型糖尿病患者大血管事件發(fā)生率。因此，亟需深入探索糖尿病患者心血管并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)增高的深層機(jī)制，奠定糖尿病患者心血管事件源頭性防治的理論基礎(chǔ)。
　　 胰島素抵抗貫穿于糖尿病的整個(gè)病程。UKPDS資料表明，在血糖未明顯升高以前，單胰島素抵抗就可引起大血管病變。胰島素抵抗是糖尿病代謝性異常和心血管疾病的原始動(dòng)因和致病基礎(chǔ)。胰島素抵抗的選擇性使血管平滑肌和成纖維細(xì)胞增殖增強(qiáng)。“選擇性胰島素抵抗”的研究

4、指出，在胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下，MAPK增殖通路活性明顯增強(qiáng)，而Akt代謝通路顯著受損。TRIB3作為Akt和MAPK共同的調(diào)節(jié)蛋白，與“選擇性胰島素抵抗”密切相關(guān)。因此，我們推測(cè)TRIB3不僅通過Akt信號(hào)途徑引起胰島素抵抗和參與糖尿病發(fā)病，并可能通過調(diào)控Akt及MAPK信號(hào)途徑而影響糖尿病大血管病變的發(fā)生和進(jìn)展。因此，本課題將建立2型糖尿病大血管病變大鼠模型，采用RNAi技術(shù)，構(gòu)建能夠在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)siRNA的腺病毒表達(dá)載體，誘導(dǎo)T

5、RIB3基因沉默，研究TRIB3在糖尿病大血管病變發(fā)生發(fā)展中的作用，綜合運(yùn)用各種病理學(xué)組織學(xué)染色技術(shù)研究TRIB3基因沉默后大血管形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化。通過分析上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探討TRIB3在糖尿病大血管病變中的作用及其可能機(jī)制。這些結(jié)果將為糖尿病心血管并發(fā)癥患者的早期防治提供新靶點(diǎn)，具有重要的學(xué)術(shù)理論意義和潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。
　　 研究目的：
　　 1.探討高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素建立2型糖尿病大血管病變大鼠動(dòng)物模型的可

6、行性；
　　 2.2型糖尿病大血管病變大鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)染TRIB3-shRNA腺病毒，觀察糖尿病大血管病變改善情況；
　　 3.在細(xì)胞分子水平、組織學(xué)水平和整體功能水平研究TRIB3基因沉默改善2型糖尿病大血管病變的機(jī)制；
　　 研究方法：
　　 1.5周齡健康雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠60只，行腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT)及腹腔胰島素耐量試驗(yàn)(IPITT)后隨機(jī)分為4組：對(duì)照組(Cont

7、rol組)、普通飲食STZ組(Chow+STZ組)、高脂高糖飲食組(HF組)、DM組(DM組)。Control組和Chow+STZ組大鼠喂以基礎(chǔ)飼料，主要組成為20％粗蛋白，3％粗脂肪，3％粗纖維，其他74％(包括碳水化合物、微量元素等)。HF組和DM組大鼠喂以高糖高脂高熱量飼料，主要成分為34.5％脂肪、17.5％蛋白質(zhì)、48％碳水化合物。4周后再次行IPGTT及IPITT，DM組大鼠出現(xiàn)胰島素抵抗者給予一次性腹腔注射STZ27.5m

8、g/kg，同時(shí)Chow+STZ組大鼠給予一次性腹腔注射STZ27.5mg/kg。Control組和HF組大鼠給予同等劑量枸櫞酸鈉緩沖液腹腔注射。各組以原飼料繼續(xù)喂養(yǎng)1周后，留取靜脈血，測(cè)定空腹血糖(FBG)和空腹胰島素(FINS)，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)(ISI，ISI=Ln(FINS×FBG)-1)。連續(xù)兩次空腹血糖≥11.1mmol/L，胰島素敏感指數(shù)降低且有多尿、多飲、多食現(xiàn)象的大鼠作為成模大鼠納入實(shí)驗(yàn)；
　　 2.5周齡健康

9、雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠30只，糖尿病造模過程同上，造模成功后隨機(jī)分為DM-Vector組和DM-siRNA組。糖尿病成模12周后，DM-siRNA組大鼠經(jīng)頸靜脈注射pAdxsi-TRIB3-shRNA腺病毒2.5×1010PFU/只，DM-Vector組注射pAdxsi空病毒載體2.5×1010PFU/只，2周后補(bǔ)充注射一次，劑量同第一次，腺病毒注射4周后處死動(dòng)物留取標(biāo)本。
　　 3.腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)(I

10、PGTT)及腹腔胰島素耐量試驗(yàn)(IPITT)：大鼠禁食12h后(禁食不禁水)，斷尾取血測(cè)定空腹血糖，繼而給予腹腔注射20％葡萄糖(1g葡萄糖/kg體重)，于注射葡萄糖后15min、30min、60min、120min按時(shí)從尾靜脈取血測(cè)定血糖水平。采用強(qiáng)生穩(wěn)步血糖儀和試紙條測(cè)定血糖。通過IPGTT結(jié)果計(jì)算血糖曲線下面積(AUC0f glucose，AUCg)。大鼠禁食4h后(禁食不禁水)行IPITT，給予腹腔注射胰島素(1U胰島素/kg體

11、重)，余同IPGTT；
　　 4.血液生化指標(biāo)的測(cè)定：檢測(cè)血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)的水平，測(cè)定血糖和血清胰島素，計(jì)算胰島素敏感指數(shù)；
　　 5.血流動(dòng)力學(xué)監(jiān)測(cè)：所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物通過大鼠尾動(dòng)脈血壓測(cè)量?jī)x監(jiān)測(cè)血壓和心率；
　　 6.腹主動(dòng)脈超聲：采用二維、脈沖多普勒和背向散射積分等超聲技術(shù)，連續(xù)觀察2型糖尿病大血管病變發(fā)生和發(fā)展過程中腹主動(dòng)脈結(jié)構(gòu)和功能的變化；
　　 7.病理學(xué)

12、檢測(cè)：對(duì)大鼠主動(dòng)脈組織分別進(jìn)行HE染色、Masson染色、天狼猩紅染色以及Verhoeff染色，應(yīng)用圖象分析儀測(cè)定主動(dòng)脈中層厚度，主動(dòng)脈血管周圍膠原面積/管腔面積，主動(dòng)脈中膜膠原比例，主動(dòng)脈中膜彈力纖維比例，主動(dòng)脈膠原與彈力纖維的比值，計(jì)算平均主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)積分；
　　 8.免疫組織化學(xué)染色：應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法，光鏡下觀察大鼠主動(dòng)脈間質(zhì)的Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原分布情況；
　　 9.大鼠主動(dòng)脈羥脯氨酸含量測(cè)定：將干燥至恒重的

13、大鼠主動(dòng)脈組織稱重后置于6 mol/L HCl中110℃水解16h，應(yīng)用ELISA試劑盒測(cè)定水解物中羥脯氨酸的含量。因羥脯氨酸在膠原組織中占13.5％，所以最終結(jié)果顯示為膠原含量(ug/mg主動(dòng)脈干重)；
　　 10.實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)：取新鮮大鼠主動(dòng)脈組織，Trizol法提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TRIB3 mRNA相對(duì)表達(dá)量；
　　 11.Western blot檢測(cè)：取新鮮大鼠主動(dòng)脈組織，提

14、取蛋白，Western blot檢測(cè)主動(dòng)脈組織內(nèi)TRIB3、膠原Ⅰ、膠原Ⅲ、磷酸化及非磷酸化的MKK4、JNK、P13K、Akt的蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1、實(shí)驗(yàn)?zāi)└鹘M大鼠的一般狀況比較：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠日飲水量、日攝食量及24h尿量均明顯增加(P<0.05)；與Control組大鼠相比，HF組大鼠體重明顯增加，日飲水量、日攝食量及24h尿量均有所增加(f<0.05)；與Con

15、trol組大鼠相比，DM組大鼠日飲水量、日攝食量及24h尿量均顯著增加(P<0.01)。與HF組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠日飲水量、24h尿量明顯增多(P<0.05～0.001)；與HF組大鼠相比，DM組大鼠日飲水量、日攝食量及24h尿量均顯著增加(P<0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠日飲水量、日攝食量及24h尿量均明顯增加(P<0.001)。
　　 2、實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠腹腔葡萄糖耐量試驗(yàn)(IPGTT

16、)及腹腔胰島素耐量試驗(yàn)(IPITT)結(jié)果分析：
　　 (1)IPGTT結(jié)果分析：
　　 DM組大鼠高脂高糖飲食4周后與高脂高糖飲食前IPGTT結(jié)果顯示：與高脂高糖飲食前相比，DM組大鼠高脂高糖飲食4周后在IPGTT試驗(yàn)0min、30min、60min、120min的血糖值均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)；血糖曲線下面積(AUCg)明顯增大(P<0.05)。
　　 2型糖尿病成模后12周各組大鼠IP

17、GTT結(jié)果顯示：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠在IPGTT試驗(yàn)30min及60min的血糖值明顯升高(P<0.05)；與Control組大鼠相比，HF組大鼠在IPGTT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Control組大鼠相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)15min、60min的血糖值均顯著升高(P<0.01)。與Chow+STZ組相比，HF組大鼠在IPGTT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Chow+STZ組

18、相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)15min的血糖值顯著升高(P<0.05)。與HF組相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)120min的血糖明顯升高(P<0.05)。與Control組相比，Chow+STZ組及DM組的血糖曲線下面積均明顯增大(P<0.05～0.01)。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)㊣PGTT試驗(yàn)結(jié)果顯示：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠在IPGTT試驗(yàn)60min、120min的血糖值均顯著升高(P<0.05)；與C

19、ontrol組大鼠相比，HF組大鼠在IPGTT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Control組大鼠相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)15min、60min、120min的血糖值均顯著升高(P<0.05)。與Chow+STZ組相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)15min、30min的血糖值明顯升高(P<0.05)。與HF組相比，DM組大鼠在IPGTT試驗(yàn)60min、120min的血糖明顯升高(P<0.05)。與Control組相比，Ch

20、ow+STZ組、HF組及DM組的血糖曲線下面積(AUCg)均明顯增大(P<0.05)。與HF組大鼠相比，DM組血糖曲線下面積明顯增大(P<0.05)。
　　 (2)IPITT結(jié)果分析：
　　 DM組大鼠高脂高糖飲食4周后與高脂高糖飲食前IPITT結(jié)果顯示：與高脂高糖飲食前相比，DM組大鼠高脂高糖飲食4周后在IPITT試驗(yàn)0min、15min、30min、60min、120min的血糖值均顯著升高(P<0.05)；血糖曲線

21、下面積明顯增大(P<0.01)。
　　 2型糖尿病糖尿病成模后12周各組大鼠IPITT結(jié)果顯示：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠IPITT試驗(yàn)15min、30min、60min及120min的血糖值明顯升高(P<0.05～P<0.01)；與Control組大鼠相比，HF組大鼠在IPITT試驗(yàn)0min、15min、30min、60min及120min的血糖值均顯著升高(P<0.05～P<0.01)；與Contro

22、l組大鼠相比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)0min、15min、30min、60min及120min的血糖值均顯著升高(P<0.05～P<0.01)。與Chow+STZ組相比，HF組大鼠在IPITT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Chow+STZ組相比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與HF組相比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)0min、15min、30min、60min的血糖值均顯著升高(P<0.05)。與C

23、ontrol組相比，Chow+STZ組、HF組及DM組的血糖曲線下面積均明顯增大(P<0.05～P<0.01)；與HF組大鼠相比，DM組血糖曲線下面積明顯增大(P<0.05)。
　　 實(shí)驗(yàn)?zāi)㊣PITT試驗(yàn)結(jié)果顯示：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠IPITT試驗(yàn)15min的血糖值明顯升高(P<0.05)；與Control組大鼠相比，HF組大鼠在IPITT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Control組大鼠相

24、比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)15min、60min、120min的血糖值均明顯升高(P<0.05)。與Chow+STZ組相比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與HF組相比，DM組大鼠在IPITT試驗(yàn)各時(shí)間點(diǎn)血糖值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Control組相比，Chow+STZ組、HF組及DM組的血糖曲線下面積均明顯增大(P<0.05)。與HF組大鼠相比，DM組血糖曲線下面積明顯增大(P<0.05)。
　　

25、3、生化指標(biāo)的測(cè)定：實(shí)驗(yàn)前各組大鼠生化指標(biāo)無明顯差異；高脂飲食4周后，與Control相比，HF組及DM組血清TG、FFA及FINS均明顯升高(P<0.05)，ISI明顯降低(P<0.05)，F(xiàn)BG無顯著變化，提示注射STZ前DM組大鼠已存在胰島素抵抗；STZ注射后一周，與Control相比，Chow+STZ組及DM組FBG明顯升高(P<0.05)，ISI顯著降低(P<0.05)，HF組及DM組血清TG、FFA明顯升高(P<0.05)，

26、FINS無顯著差異；糖尿病成模后12周，與Control相比，DM組FBG明顯升高(P<0.05)，ISI顯著降低(P<0.05)，DM組血清TC、TG、FFA明顯升高(P<0.05)，F(xiàn)INS無顯著差異；糖尿病成模后14周，與Control相比，DM組血清TC、TG、FFA明顯升高(P<0.05)，ISI顯著降低(P<0.05)，F(xiàn)INS無顯著差異；實(shí)驗(yàn)?zāi)?，與Control相比，DM組血清TC、TG、FFA及FBG均顯著升高(P<0.

27、05)，ISI明顯降低(P<0.05)。結(jié)果提示，本研究以高脂飲食誘導(dǎo)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素注射建立的2型糖尿病動(dòng)物模型，具有中度胰島素抵抗，中度高血糖、高血脂等表現(xiàn)，基本符合2型糖尿病的臨床特點(diǎn)。
　　 4、血壓及心率監(jiān)測(cè)：實(shí)驗(yàn)過程中各組大鼠收縮壓、舒張壓及平均動(dòng)脈壓均無差異；實(shí)驗(yàn)?zāi)?，與Control組大鼠及Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠心率略有增加，但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 5、腹主動(dòng)脈超聲監(jiān)測(cè)
　

28、　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，與Control組大鼠比較，HF組大鼠各項(xiàng)指標(biāo)變化均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Control組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠腹主動(dòng)脈Peterson彈性模量、僵硬度指數(shù)均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.001)，舒張末期流速、橫斷面擴(kuò)張系數(shù)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.001，)；與Control組大鼠相比，DM組大鼠腹主動(dòng)脈收縮期內(nèi)徑、舒張期內(nèi)徑、Peterson彈性模量、僵硬度指數(shù)均明顯增加

29、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.001)，收縮期峰值流速、舒張末期流速、橫斷面擴(kuò)張系數(shù)均降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.001)。與HF組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠腹主動(dòng)脈僵硬度指數(shù)明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與HF組大鼠相比，DM組大鼠腹主動(dòng)脈舒張期內(nèi)徑、Peterson彈性模量、僵硬度指數(shù)均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.001)，收縮期峰值流速、舒張末期流速均降低

30、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～P<0.001)。與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠腹主動(dòng)脈收縮期內(nèi)徑和舒張期內(nèi)徑明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.001)。余各組大鼠指標(biāo)比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，超聲背向散射積分結(jié)果顯示，與Control組大鼠比較，Chow+STZ組和DM組大鼠腹主動(dòng)脈校正平均背向散射積分(IBS％)均明顯增加(P<0.01)；與Control組大鼠比較，Chow+

31、STZ組、HF組和DM組大鼠腹主動(dòng)脈背向散射積分周期變化幅度(CVIB)均明顯降低(P<0.001)；與HF組比較，Chow+STZ組和DM組大鼠腹主動(dòng)脈IBS％明顯增加(P<0.05～0.01)，DM組大鼠腹主動(dòng)脈CVIB明顯降低(P<0.01)。
　　 6、主動(dòng)脈病理學(xué)分析
　　 (1)主動(dòng)脈HE染色，與Control組大鼠相比，DM組大鼠內(nèi)皮細(xì)胞排列紊亂、致密，仍緊貼于內(nèi)彈力板上。血管平滑肌細(xì)胞肥大、扭曲、排列紊亂

32、，層數(shù)增多，細(xì)胞核大小不一，細(xì)胞膜及核膜欠清晰、完整，胞漿染色不均，可見大量肌纖維斷裂。定量分析結(jié)果顯示：與Control組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈中膜厚度明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(72.73.09±2.12 vs。58.09±0.97μm，P<0.01；62.69±0.67 vs.58.09±0.97μm，P<0.05；72.38±2.30 vs.58.09±0.97μm，P<0.001)；與HF組大

33、鼠相比，Chow+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈中膜厚度略有增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈中膜厚度略有增加，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)Masson染色顯示，大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞及彈力纖維呈紅色，間質(zhì)膠原纖維呈藍(lán)綠色。Control組大鼠主動(dòng)脈膠原纖維分布均勻、纖細(xì)，相鄰細(xì)胞的膠原纖維網(wǎng)完好，血管周圍纖維化程度很輕；與Control組相比，DM組大鼠主動(dòng)脈膠原組織明顯

34、增多，排列紊亂，分布不勻，血管周圍纖維化明顯。
　　 天狼猩紅染色：在普通顯微鏡下，Control組大鼠主動(dòng)脈膠原纖維均勻纖細(xì)，血管周圍有極少量膠原；偏振光顯微鏡下，Control組大鼠主動(dòng)脈中膜未見明顯顯色，外膜以Ⅰ型及Ⅲ型膠原纖維為主。在普通顯微鏡下，DM組大鼠主動(dòng)脈間質(zhì)膠原纖維明顯增多，迂曲，排列紊亂，斷裂明顯增多；偏振光顯微鏡下，DM組大鼠主動(dòng)脈中膜和外膜Ⅰ型及Ⅲ型膠原明顯增加，膠原纖維斷裂明顯。半定量分析結(jié)果顯示，與C

35、ontrol組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈管周膠原面積/管腔面積(PVCA/LA)均有明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.06±0.0029 vs.0.03±0.0015，P<0.001:0.04±0.0016 vs.0.03±0.0015，P<0.05；0.10±0.007 vs.0.03±0.0015，P<0.01)，中膜膠原比例均有明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(4.42±0.48 vs.1.12±0.14，

36、P<0.001；2.45±0.22vs.1.12±0.14，P<0.01；5.70±0.31 vs.1.12±0.14，P<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈中膜膠原比例及管周膠原面積/管腔面積(PVCA/LA)均有明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01～0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈管周膠原面積/管腔面積(PVCA/LA)有所增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)：

37、與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈中膜膠原比例有所增加，但差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (3)Verhoeff彈力纖維染色顯示：Control組大鼠主動(dòng)脈彈力纖維分布均勻、整齊，完整無斷裂；DM組大鼠主動(dòng)脈彈力纖維迂曲，排列紊亂、疏松，分布欠均勻，可見明顯斷裂。半定量分析結(jié)果顯示，與Control組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈中膜彈力纖維比例均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.19±0.76

38、vs.11.96±0.75，P<0.001；8.83±0.98 vs.11.96±0.75，P<0.05；4.70±0.36 vs.11.96±0.75，P<0.001)；與HF組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈中膜彈力纖維比例明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈中膜彈力纖維比例略有降低，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Control組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈膠原/彈

39、力纖維比值均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.57±0.09 vs.0.05±0.007，P<0.01；0.17±0.0024 vs.0.05±0.007，P<0.01；0.71±0.075 vs.0.05±0.007，P<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈膠原/彈力纖維比值均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05～0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈膠原/彈力纖維比值略有增

40、加，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與Control組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈平均主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)積分均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈平均主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)積分均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01～0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈平均主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)積分略有增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (4)采用

41、羥脯氨酸法測(cè)定大鼠主動(dòng)脈膠原含量。結(jié)果顯示：與Control組相比，Chow+STZ組、HF組、DM組大鼠主動(dòng)脈膠原含量均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(13.34±0.37 vs.7.01±0.21 ug/mg血管干重，P<0.001；8.47±0.21 vs。7.01±0.21 ug/mg血管干重，P<0.01；15.34±0.47 vs.7.01±0.21 ug/mg血管干重，P<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組和

42、DM組大鼠主動(dòng)脈膠原含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈組織膠原含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　 (5)免疫組化結(jié)果顯示：與Control組相比，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ陽性表達(dá)明顯增多，HF組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)collagenⅠ、collagenⅢ表達(dá)有所增加，DM組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、coll

43、agenⅢ陽性表達(dá)顯著增多；與HF組相比，Chow+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈內(nèi)collagenⅠ、collagenⅢ陽性表達(dá)均明顯增多；與Chow+STZ組相比，DM組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ陽性表達(dá)均明顯增多。
　　 (6)CollagenⅠ、collagenⅢ的Western blot結(jié)果顯示：與Control組相比，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表達(dá)明顯增加

44、，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(collagenⅠ：0.82±0.05 VS.0.51±0.05，P<0.001；collagenⅢ：0.62±0.03 VS.0.31±0.02，P<0.001)，HF組主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白含量略有增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(collagenⅠ：0.60±0.03 VS.0.51±0.05，P<0.01：collagenⅢ：0.47±0.03 VS.0.31±0.02，P<0.05)，D

45、M組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表達(dá)顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(collagenⅠ：1.04±0.06 VS.0.51±0.05，P<0.001；collagenⅢ：0.95±0.04 VS.0.31±0.02，P<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表達(dá)明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01～0.001)，DM組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ

46、、collagenⅢ蛋白表達(dá)明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與Chow+STZ組大鼠比較，DM組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表達(dá)顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (7)與Control組相比，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了1.33倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，HF組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了72％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0

47、.001)，DM組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了1.78倍，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與HF組大鼠相比，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了35％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，DM組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了61％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠主動(dòng)脈TRIB3蛋白表達(dá)量增加了19％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)
　　

48、 (8)Western blot檢測(cè)Akt和MAPK通路各關(guān)鍵信號(hào)分子
　　 ①Control組、Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈磷酸化PI3K與總PI3K比值分別為：0.97，0.67，0.75，0.45。與Control組大鼠相比，Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈PI3K磷酸化水平均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)；與HF組大鼠相比較，Chow+STZ組及DM組大鼠主動(dòng)脈PI3K磷酸化

49、水平均明顯降低(P<0.001)；與Chow+STZ組大鼠相比，DM組大鼠PI3K磷酸化水平明顯降低(P<0.01)。
　　 ②Control組、Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈磷酸化Akt與總Akt的比值分別為：0.90，0.48，0.61，0.29。與Control組相比，Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈Akt的磷酸化水平均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01～P<0.001)，其中DM組大鼠主

50、動(dòng)脈Akt的磷酸化水平最低，為Control組的32％(P<0.001)；與HF組相比，Chow+STZ組及DM組大鼠主動(dòng)脈Akt的磷酸化水平均有下降，以DM組降低最為顯著，為HF組的47％(P<0.001)；與Chow+STZ組相比，DM組大鼠主動(dòng)脈Akt的磷酸化水平有所下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ③Control組、Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈磷酸化MKK4與總MKK4比值分別為：0.59，0.85，0

51、.64，1.03。與Control組相比，Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈MKK4磷酸化水平均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05～0.001)，其中DM組大鼠主動(dòng)脈MKK4的磷酸化水平最高，為Control組的1.86倍(P<0.001)；與HF組比較，Chow4+STZ組、DM組大鼠主動(dòng)脈MKK4磷酸化水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.001)；與Chow+STZ組相比，DM組大鼠主動(dòng)脈MKK4磷酸化水平

52、明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 ④Control組、Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈磷酸化JNK與總JNK比值分別為：0.45，0.78，0.60，0.97。與Control組相比，Chow+STZ組、HF組及DM組大鼠主動(dòng)脈JNK磷酸化水平均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01～0.001)，其中DM組大鼠主動(dòng)脈JNK的磷酸化水平最高，為Control組的2.15倍(P<0.001)；與

53、HF組比較，DM組大鼠主動(dòng)脈JNK磷酸化水平明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，Chow+STZ組大鼠主動(dòng)脈JNK磷酸化水平略有升高，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Chow+STZ組相比，DM組大鼠主動(dòng)脈JNK磷酸化水平略有升高，差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 7、TRIB3基因沉默后主動(dòng)脈TRIB3 mRNA及蛋白的表達(dá)
　　 主動(dòng)脈TRIB3 mRNA及蛋白的表達(dá)：RT-PCR結(jié)果顯示：與糖尿病空載體(DM-Vect

54、or)組相比，糖尿病siRNA(DM-siRNA)組大鼠主動(dòng)脈TRIB3 mRNA表達(dá)降低了66％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。Western blot結(jié)果顯示：與DM-Vector組相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈TRIB3表達(dá)降低，其蛋白水平下降了約67%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　 8、TRIB3基因沉默對(duì)2型糖尿病大鼠一般情況的改善
　　 經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)后，與DM-Vecto

55、r組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠日飲水量顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，同時(shí)DM-siRNA組大鼠24h尿量也顯著減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。DM-siRNA組大鼠日攝食量較DM-Vector組均有所降低，但未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DM-siRNA組大鼠體重、收縮壓、舒張壓、平均動(dòng)脈壓及心率較DM-Vector組無變化。
　　 9、TRIB3基因沉默對(duì)IPGTT及IPITT的改變
　　 (1)I

56、PGTT結(jié)果顯示：經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)后，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠在IPGTT試驗(yàn)30min、120min的血糖值均明顯降低(P均<0.05)，血糖曲線下面積明顯減少(P=0.041)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 (2)IPITT結(jié)果顯示：經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)后，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠在IPITT試驗(yàn)0min、120min的血糖值均明顯降低(P均<0.05)，血糖

57、曲線下面積明顯減少(P=0.030)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 10、TRIB3基因沉默對(duì)血清生化指標(biāo)的影響
　　 經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)4周后，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠血清總膽固醇明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(4.98±1.62 VS2.57±0.62 mmol/L，P<0.05)；DM-siRNA組大鼠血清甘油三酯明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3.96±1.01 VS.7.74±2.1

58、5mmol/L；P<0.05)；DM-siRNA組大鼠血清游離脂肪酸明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(355.85±26.24 VS.464.69±31.23μ mol/L，P<0.05)；DM-siRNA組大鼠血清空腹血糖明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(15.63±2.04 VS.24.58±3.04mmol/L，P<0.05)；DM-siRNA組大鼠胰島素敏感指數(shù)明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(-5.17±0.14 vs.-5.67±0.1

59、4，P<0.05)；DM-siRNA組大鼠空腹胰島素水平較空載體組略有降低，但差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 11、TRIB3基因沉默對(duì)腹主動(dòng)脈超聲指標(biāo)的影響
　　 經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)4周后，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠腹主動(dòng)脈舒張期內(nèi)徑明顯減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；DM-siRNA組大鼠收縮期峰值流速和舒張末期流速均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DM-siRNA

60、組大鼠腹主動(dòng)脈Peterson彈性模量明顯減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DM-siRNA組大鼠腹主動(dòng)脈橫斷面擴(kuò)張系數(shù)明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；DM-siRNA組大鼠腹主動(dòng)脈僵硬度指數(shù)明顯減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。
　　 經(jīng)TRIB3腺病毒干預(yù)4周后，超聲背向散射積分結(jié)果顯示，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠腹主動(dòng)脈IBS％明顯減小，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.7

61、6±0.14 vs1.42±0.15，P<0.001)，CVIB明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(4.17±0.81 vs5.21±0.57，P<0.01)。
　　 12、TRIB3基因沉默改善糖尿病大鼠主動(dòng)脈重構(gòu)
　　 (1)主動(dòng)脈HE染色可見，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈僅有部分內(nèi)皮細(xì)胞部分突起、斷裂，結(jié)構(gòu)不完整，排列趨于整齊。血管平滑肌細(xì)胞呈長(zhǎng)梭形，平行排列，層數(shù)減少，細(xì)胞核大小基本均一

62、，細(xì)胞膜及核膜清晰、完整，胞漿染色均勻，肌纖維斷裂明顯減少。分析結(jié)果顯示：與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈中膜厚度明顯減少(74.88±1.21μm vs。69.38±1.11μm，P<0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 (2)Masson染色顯示，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈膠原纖維明顯減少，膠原纖維變細(xì)，排列區(qū)域規(guī)整，分布基本均勻。天狼猩紅染色，與DM-Vect

63、or組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈間質(zhì)膠原纖維明顯減少，排列較為整齊，斷裂明顯減少；偏振光顯微鏡下，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈中膜和外膜Ⅰ型及Ⅲ型膠原纖維均明顯減少，膠原纖維斷裂減少。半定量分析結(jié)果顯示，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈血管周圍膠原面積/管腔面積(PVCA/LA)明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.10±0.005 vs.0.06±0.006，P<0.001)；與DM-Vecfor組

64、大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈中膜膠原比例明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3.77±0.36 vs.2.48±0.22，P<0.01)。
　　 (3)Verhoeff彈力纖維染色染色顯示：與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈彈力纖維趨于均勻，整齊，斷裂明顯減少。半定量分析結(jié)果顯示，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈中膜彈力纖維比例均明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(5.29±0

65、.36 VS.7.79±0.72，P<0.01)；DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈膠原/彈力纖維比值明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.75±0.09 VS。0.36±0.07，P<0.01)；DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈平均主動(dòng)脈壁結(jié)構(gòu)積分有所降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)
　　 (4)采用羥脯氨酸法測(cè)定大鼠主動(dòng)脈膠原含量，結(jié)果顯示：與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈膠原含量明顯減少，差異具有統(tǒng)計(jì)

66、學(xué)意義(14.16±0.30vs.10.70±0.19μg/mg血管干重，P<0.001)。
　　 (5)TRIB3基因沉默降低了主動(dòng)脈Ⅰ、Ⅲ型膠原的表達(dá)
　　 免疫組化結(jié)果顯示：與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ陽性表達(dá)均有所減少。Western blot結(jié)果顯示：與OM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collag

67、enⅢ蛋白表達(dá)有所降低。定量分析Western blot結(jié)果顯示，與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈collagenⅠ、collagenⅢ蛋白表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)，其中collagenⅠ蛋白表達(dá)降至OM-Vector組大鼠的61％(P<0.01)，collagenⅢ蛋白表達(dá)下降至DM-Vector組大鼠的59％(P<0.01)。
　　 (6)TRIB3基因沉默后主動(dòng)脈PI3

68、K/Akt及MKK4/JNK通路各關(guān)鍵分子的表達(dá)
　　 ①與OM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈PI3K的磷酸化水平明顯升高，其蛋白表達(dá)為DM-Vector組大鼠的1.79倍(P<0.001)。
　　 ②與OM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈Akt的磷酸化水平明顯升高，其蛋白表達(dá)為DM-Vector組大鼠的1.94倍(P<0.001)。
　　 ③與DM-Vector組大

69、鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈MKK4的磷酸化水平明顯降低，其蛋白表達(dá)降為DM-Vector組大鼠的37％(P<0.001)。
　　 ④與DM-Vector組大鼠相比，DM-siRNA組大鼠主動(dòng)脈JNK的磷酸化水平明顯降低，其蛋白表達(dá)下降至DM-Vector組大鼠的66％(P<0.001)。
　　 結(jié)論：
　　 (1)高糖高脂高熱量飲食喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素誘發(fā)的2型糖尿病狀態(tài)穩(wěn)定，符合2型糖尿病的臨床特

70、點(diǎn)，能夠出現(xiàn)糖尿病大血管病變，建模因素中沒有不可干預(yù)因素，適于開展后續(xù)的糖尿病干預(yù)研究；
　　 (2)2型糖尿病大鼠主動(dòng)脈重構(gòu)以血管硬化為主，主要表現(xiàn)為血管壁內(nèi)膠原含量明顯增加，主動(dòng)脈中膜厚度增加，主動(dòng)脈內(nèi)徑增加，主動(dòng)脈僵硬度指數(shù)明顯增加；
　　 (3)2型糖尿病狀態(tài)下，TRIB3表達(dá)上調(diào)，進(jìn)而激活MMK4及JNK信號(hào)傳導(dǎo)途徑引起Ⅰ、Ⅲ型膠原合成明顯增加，最終導(dǎo)致血管間質(zhì)纖維化，是2型糖尿病大血管病變發(fā)生的重要分子機(jī)制；

71、
　　 (4)2型糖尿病大鼠發(fā)生主動(dòng)脈重構(gòu)的同時(shí)，主動(dòng)脈組織TRIB3表達(dá)明顯升高，PI3K/Akt信號(hào)通路活性減弱，而MAPK信號(hào)通路明顯增強(qiáng)，提示選擇性胰島素抵抗的信號(hào)通路參與糖尿病大血管病變的發(fā)??；
　　 (5)TRIB3基因沉默能夠通過減少主動(dòng)脈內(nèi)膠原含量，降低主動(dòng)脈中膜厚度，調(diào)整主動(dòng)脈內(nèi)膠原/彈性纖維比值，從而減輕主動(dòng)脈硬化，延緩了主動(dòng)脈重構(gòu)的進(jìn)展；
　　 (6)TRIB3基因沉默延緩2型糖尿病大鼠主動(dòng)

72、脈重構(gòu)的同時(shí)，主動(dòng)脈組織TRIB3表達(dá)明顯降低，PI3K/Akt信號(hào)通路活性隨之增加，而MAPK信號(hào)通路明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)以TRIB3為核心的選擇性胰島素抵抗參與了糖尿病大血管病變的發(fā)生和發(fā)展；
　　 (7)TRIB3基因沉默能夠改善2型糖尿病大鼠胰島素抵抗和糖脂代謝異常，有效地減少了糖尿病大血管病變發(fā)生的危險(xiǎn)因素；
　　 (8)TRIB3基因沉默主要通過增加主動(dòng)脈組織內(nèi)Akt的磷酸化水平，阻斷主動(dòng)脈組織內(nèi)MMK4及J