牙齦卟啉單胞菌對牙齦上皮細胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達影響的研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學博士學位論文牙齦卟啉單胞菌對牙齦上皮細胞基質(zhì)金屬蛋白酶表達影響的研究姓名：王艦申請學位級別：博士專業(yè)：病原生物學指導教師：羅恩杰20090301分別接種于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液中，將牙齦卟啉單胞菌與牙齦上皮細胞按100：1的比例接種于上述培養(yǎng)液中。3、細胞因子檢測：應用ELISA方法檢測牙齦卟啉單胞菌接種前、接種后1h、3h、6h、12h、24h培養(yǎng)液上清中TNF僅、IL6、IL8、IL1p的表達水平，同時提取培養(yǎng)

2、液中牙齦上皮細胞總RNA，應用RTPCR方法檢測細菌接種前、接種后1h、3h、6h、12h、24h上述細胞因子表達水平。4、基質(zhì)金屬蛋白酶檢測：采用Westernblotting檢測牙齦卟啉單胞菌感染前后牙齦上皮細胞表達MMP2、MMP3、MMP7、MMP9的水平變化。進一步采用實時定量PCR方法檢測MMP2、MMP3、MMP7、MMP9的mRNA水平變化情況。5、TNFa上調(diào)MMP2和MMP9表達檢測：取三種不同濃度的TNF0【作用于

3、牙齦上皮細胞，用實時定量PCR檢測TNF0【加入前、加入后牙齦上皮細胞MMP2和MMP9的表達。使用抗TNFa中和性抗體處理經(jīng)牙齦卟啉單胞菌感染過的牙齦上皮細胞后，檢測MMP2和MMP9的表達。結(jié)果1、牙齦卟啉單胞菌對牙齦上皮細胞表達n師0【、IL6、IL8、IL1p的影響ELISA結(jié)果：未經(jīng)感染的牙齦上皮細胞上清液中未檢測出TNF0【、IL6、IL8、IL113；經(jīng)牙齦卟啉單胞菌感染后1、3、6、12及24小時，細胞上清液中檢測出TN

4、F0【，分別為112j：17pg／ml、26764pg／ml、452113pg／ml、826164pg／ml和1283213pg／ml；IL一113分別為14623pg／ml、31479pg／ml、505士98pg／ml、724147pg／ml和926168pg／ml；IL6分別為3404pg／rrd、83士11pg／ml、126士13pg／ml、232士33pg／ml和35357pg／ml；IL8分別為5706pg／ml、94413p