人牙齦上皮細(xì)胞上清液對(duì)牙髓細(xì)胞增殖及分化影響的研究.pdf

1、’767567分類號(hào)：R781UDC616314密級(jí)：一般編號(hào)：0211162008荔蕤黲碩士學(xué)位論文人牙齦上皮細(xì)胞上清液對(duì)牙髓細(xì)胞增殖及分化影響的研究學(xué)位申請(qǐng)人：：奎疊塑導(dǎo)If姓名及職稱：壅塑鏊墼塑專業(yè)名稱：!壁墾堂2005年5月18日人才齦上皮細(xì)胞上清液對(duì)牙髓細(xì)胞增殖及分化影響的研究比例(即20ul、60u1、100u1)加入96孔板孔內(nèi)，并加HDPCs培養(yǎng)基dMEM至每孔200ta1；空白對(duì)照組為每孔加入200ul的HDPCs培養(yǎng)

2、基t／一MEM。每組4個(gè)孔，共13組，37。C、5％C02培養(yǎng)內(nèi)靜置培養(yǎng)。第4d取1塊96孔板通過MTT法研究對(duì)HDPCs增殖的影響；第7d取1塊96iL板通過對(duì)培養(yǎng)后HDPCs細(xì)胞裂解液中ALP測(cè)定，研究對(duì)HDPCs分化的影響。結(jié)果：①HDPCs在8～10d后長出，呈梭形，核仁清晰，一般于15～20d長滿瓶底；HDPCs傳代后第2d細(xì)胞數(shù)量有所下降，第2～6d進(jìn)入對(duì)數(shù)增殖劌，第7d進(jìn)入生長飽和期后細(xì)胞的數(shù)量也有所下降；HDPCs免疫組

3、化染色顯示波形絲蛋白為陽性，CK染色陰性，證實(shí)為成纖維細(xì)胞；HDPCs增殖能力較好，并可見鈣化結(jié)節(jié)形成。②HGECs在倒置顯微鏡下呈多角形，核大，長滿后呈鋪路石樣；細(xì)胞生長曲線呈“滯緩一對(duì)數(shù)生長平臺(tái)”的“S”形模式；CK免疫組化染色為陽性，牙髓成纖維細(xì)胞對(duì)照為陰性，證實(shí)為上皮細(xì)胞。③相對(duì)于空白對(duì)照組(即c【MEM組)，加入上皮細(xì)胞培養(yǎng)基(KSFM)和體外培養(yǎng)第2d(處于潛伏期，未進(jìn)入增殖期)的HGECs上清液對(duì)HDPCs的增殖和分化均呈

4、抑制作用，而加入體外培養(yǎng)第4d和第6d(均處于對(duì)數(shù)增乏期)HGECs的E清液對(duì)HDPCs的增殖和分化均有促進(jìn)作用，并呈時(shí)間一劑量依賴關(guān)系：相對(duì)陰性對(duì)照組(即K—SFM組)，加入第2d、第4d及第6d的HGECs上清液后HDPCs的增殖和分化程度均上升。結(jié)論：①采用組織塊法成功建立了HDPCs的體外培養(yǎng)模型；②體外培養(yǎng)出的HDPCs具有較強(qiáng)的向成牙本質(zhì)細(xì)胞分化的能力，能分泌形成類牙本質(zhì)樣的鈣化結(jié)節(jié)，證實(shí)牙髓組織中存在有分化潛能的牙髓干細(xì)胞

5、(DPSCs)；⑧采用改良組織塊法和酶消化法均可成功培養(yǎng)出HGECs；④采用DispaseII冷消化法結(jié)合無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，可有效抑帶I]HGECs體外培養(yǎng)過程中成纖維細(xì)胞的污染，獲得純化的HGECs，培養(yǎng)出的細(xì)胞在形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)方面均符合上皮細(xì)胞的特征，能在較長時(shí)問內(nèi)保持上皮細(xì)胞的特性；⑤體外培養(yǎng)的HGECs的上清液對(duì)HDPCs的增殖和分化均有促進(jìn)作用，并呈時(shí)間一劑量依賴關(guān)系，證實(shí)HGECs分泌的町溶性因子町促進(jìn)HDPCs的增殖和分化