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文檔簡介
1、目的:建立人羊膜間充質干細胞(hAMSC)和小鼠卵巢上皮細胞(OSEC)共培養(yǎng)模型,初步探討hAMSC對小鼠OSEC向卵母細胞樣細胞分化的影響。
方法:采用酶消化法和差速貼壁法分離、純化 hAMSC和小鼠 OSEC,流式細胞術和免疫細胞化學染色分別鑒定 hAMSC和OSEC。應用transwell板,建立hAMSC和小鼠OSEC共培養(yǎng)模型,觀察hAMSC對小鼠OSEC細胞形態(tài)變化,免疫組化、圖像分析與實時聚合酶鏈反應(RT-P
2、CR)檢測上皮細胞、多能性和生殖細胞標志物的mRNA和蛋白表達。
結果:① P4代hAMSC呈長梭形、漩渦狀貼壁生長,流式細胞術鑒定hAMSC高表達CD44、CD90、CD73、CD105,不表達或低表達CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR。②免疫細胞化學染色結果顯示,傳至P2代的小鼠OSEC陽性表達廣譜角蛋白Pan-cytokeratin,提示小鼠OSEC為上皮細胞性來源。P3 OSEC與hAMSC共培養(yǎng)組
3、與OSEC單獨培養(yǎng)組OSEC均表達上皮角蛋白Pan-cytokeratin陽性,并可表達生殖細胞特異性的標志物Ddx4/MVH和多能性標志蛋白Oct4,且共培養(yǎng)組小鼠OSEC Pan-cytokeratin、Ddx4/MVH、Oct4三種蛋白表達明顯高于單獨培養(yǎng)組( P<0.05)。③ RT-PCR檢測結果顯示,共培養(yǎng)組小鼠OSEC生殖干細胞特征標志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVH mRNA表達量顯著高于單獨培養(yǎng)組(P<0.
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