hAMSC對小鼠卵巢上皮細胞向卵母細胞樣細胞分化的影響.pdf

1、目的：建立人羊膜間充質干細胞(hAMSC)和小鼠卵巢上皮細胞（OSEC）共培養(yǎng)模型，初步探討hAMSC對小鼠OSEC向卵母細胞樣細胞分化的影響。
　　方法：采用酶消化法和差速貼壁法分離、純化 hAMSC和小鼠 OSEC，流式細胞術和免疫細胞化學染色分別鑒定 hAMSC和OSEC。應用transwell板，建立hAMSC和小鼠OSEC共培養(yǎng)模型，觀察hAMSC對小鼠OSEC細胞形態(tài)變化，免疫組化、圖像分析與實時聚合酶鏈反應（RT-P

2、CR）檢測上皮細胞、多能性和生殖細胞標志物的mRNA和蛋白表達。
　　結果：① P4代hAMSC呈長梭形、漩渦狀貼壁生長，流式細胞術鑒定hAMSC高表達CD44、CD90、CD73、CD105，不表達或低表達CD45、CD34、CD19、CD11b和HLA-DR。②免疫細胞化學染色結果顯示，傳至P2代的小鼠OSEC陽性表達廣譜角蛋白Pan-cytokeratin，提示小鼠OSEC為上皮細胞性來源。P3 OSEC與hAMSC共培養(yǎng)組

3、與OSEC單獨培養(yǎng)組OSEC均表達上皮角蛋白Pan-cytokeratin陽性，并可表達生殖細胞特異性的標志物Ddx4/MVH和多能性標志蛋白Oct4，且共培養(yǎng)組小鼠OSEC Pan-cytokeratin、Ddx4/MVH、Oct4三種蛋白表達明顯高于單獨培養(yǎng)組（ P<0.05）。③ RT-PCR檢測結果顯示，共培養(yǎng)組小鼠OSEC生殖干細胞特征標志性基因Gdf9、Nanog、Ddx4/MVH mRNA表達量顯著高于單獨培養(yǎng)組（P<0.