高血糖對卵母細胞、二細胞胚凋亡的影響.pdf

1、背景與目的：妊娠合并糖尿病發(fā)生率可達5%-20%，未及時診斷和治療達標的妊娠合并糖尿病可引起巨大兒、胎兒畸形等并發(fā)癥，并使流產、先兆子癇等發(fā)病率及母嬰圍生期死亡率增加，妊娠合并糖尿病患者自發(fā)性流產、胎兒重要器官先天性畸形發(fā)生率高達6%-10%。研究表明高血糖誘導的胚胎細胞凋亡是導致胎兒畸形和流產的主要機制之一。
　　 然而以往對高糖誘導胚胎凋亡的研究卻局限于著床后胚胎和囊胚期。目前母體高血糖對卵母細胞和早期胚胎細胞凋亡的影響和機

2、制尚未清楚。本研究擬構建STZ 誘導糖尿病小鼠模型，檢測卵母細胞、二細胞胚凋亡率和線粒體凋亡通路Bax、caspase-3 表達水平，探討母體高血糖對卵母細胞、二細胞胚胎凋亡的影響及其可能激活的Bax-caspase-3 凋亡路徑。
　　 材料與方法：小鼠分為STZ 誘導糖尿病組和非糖尿病組。超排卵取卵和二細胞胚。采用免疫熒光法檢測卵母細胞和二細胞胚胎中Bax和caspase-3 蛋白的表達；實時定量RT-PCR檢測卵母細胞和二

3、細胞胚胎中Bax和caspase-3 mRNA的表達；Annexin-V染色法檢測卵母細胞和二細胞胚細胞凋亡；HE染色切片觀察高血糖對卵巢內卵泡發(fā)育成熟的影響；電鏡下觀察高糖環(huán)境下二細胞胚超微結構改變。
　　 結果：糖尿病組Annexin-V陽性（凋亡）卵母細胞明顯多于非糖尿病組（P<0.001 ）。免疫熒光和實時定量RT-PCR 結果顯示：糖尿病組卵母細胞中Bax和caspase-3 蛋白和mRNA 表達水平均高于非糖尿病組（

4、P<0.05 ）。HE染色切片結果顯示：高血糖使卵泡生長延遲，生長期卵泡數(shù)量減少（P<0.05 ），且體積減小。在二細胞胚方面，無論在糖尿病組還是非糖尿病組，均未檢測到Annexin-V陽性二細胞胚細胞。Bax 蛋白和mRNA 表達在糖尿病組二細胞胚中明顯高于非糖尿病組（P<0.05 ），caspase-3 蛋白和mRNA 在兩組中的表達則無差異（P>0.05 ）。電鏡觀察顯示糖尿病組二細胞胚中可見大量明顯腫脹線粒體。
　　 結