

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:研究FOXO3a(forkhead box group O)轉(zhuǎn)錄因子是否參與調(diào)控哺乳動物卵巢中裸露卵母細胞和原始卵泡內(nèi)卵母細胞的凋亡及其調(diào)控通路。
方法:(1)體外分離培養(yǎng)新生兩天大鼠卵母細胞巢和原始卵泡內(nèi)的卵母細胞。(2)實驗分組和藥物處理細胞方法:干細胞因子(Stem cell factor, SCF)和磷脂酰肌醇- 3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)抑制劑LY 294002作
2、用細胞的終濃度分別為150ng/L和25μM。實驗分為三組:未經(jīng)處理的細胞作為對照組(SCF-),SCF處理細胞組(SCF+)和SCF聯(lián)合LY 294002處理細胞組(SCF+LY 294002)。為研究SCF對AKT、FOXO3a磷酸化的影響及其調(diào)控通路,SCF處理細胞組:SCF作用于細胞5 min;SCF聯(lián)合LY 294002處理細胞組:LY 294002作用于細胞1 h后再加入SCF作用5 min。為研究SCF對卵母細胞凋亡和Bi
3、m、Bcl-2、Bax、Bad、MnSOD和p27kip1表達的影響及其調(diào)控通路,SCF處理細胞組:SCF作用于細胞24 h;SCF聯(lián)合LY 294002處理細胞組:SCF與LY 294002同時加入細胞培養(yǎng)基,共同作用24 h。(3)凋亡染色(TUNEL)觀察卵母細胞凋亡狀況。陽性結(jié)果判斷: 被染成棕黃色的為陽性細胞。凋亡率的計算方法:在400倍視野下,每張玻片上選取至少三個視野共100個細胞計數(shù)陽性卵母細胞占所有卵母細胞的百分比。(
4、4)RT-PCR、Western blot檢測觀察FOXO3a及其下游靶分子與卵母細胞凋亡的關系。(5)免疫細胞化學檢測:細胞分別與一抗FOXO3a、BIM、BAD、BAX、BCL-2、MnSOD或p27KIP1 (抗體1:25 或1:100稀釋) 及對應的二抗孵育;3,3'二氨基聯(lián)苯胺(3,3'-diaminobenzidine,DAB) 顯色。細胞陽性率的計算方法: 在400倍視野下,每張玻片上選取至少三個視野共100個細胞計數(shù),得
5、出陽性卵母細胞占所有卵母細胞的百分比。(6)采用SPSS 13. 0 軟件包進行統(tǒng)計學分析,數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差(?x±s) 表示,組間比較均作單向方差分析, P <0.05有統(tǒng)計學差異,所有實驗至少重復三次。
結(jié)果:(1)SCF抑制卵母細胞凋亡;而LY 294002可完全阻斷上述效果。(2)SCF不影響卵母細胞AKT、FOXO3a總蛋白表達水平,但可使其磷酸化水平增加;磷酸化的AKT活性增強,而磷酸化的FOXO3a 活性下
6、降。(3)SCF可使Bim、Bax、Bad和p27kip1表達下調(diào),此作用同樣可被LY 294002逆轉(zhuǎn)。(4)SCF可使MnSOD表達上調(diào),LY 294002可阻斷該效果。(5)SCF不影響B(tài)cl-2的表達。
結(jié)論:(1)FOXO3a通過SCF-PI3K/AKT信號通路參與對新生大鼠卵母細凋亡和原始卵泡形成的調(diào)控。(2)Bim、Bax、Bad、MnSOD和p27kip1可能作為FOXO3a的下游靶分子參與以上調(diào)控過程。<
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- BMP4-Smad信號通路在小鼠原始卵泡卵母細胞凋亡中的調(diào)控作用.pdf
- SCF在新生大鼠卵巢鎘暴露致卵母細胞凋亡及其相關基因表達中的作用.pdf
- 水牛卵母細胞體外成熟及其調(diào)控的研究.pdf
- 高血糖對卵母細胞、二細胞胚凋亡的影響.pdf
- WNT信號通路受體家族Frizzleds對豬卵母細胞體外成熟的影響.pdf
- 孕酮介導的卵母細胞成熟信號通路在棉蚜生殖方式轉(zhuǎn)換中的作用研究.pdf
- 水牛卵母細胞體外成熟與凋亡的初步研究.pdf
- 補精益視片調(diào)控MNU誘導的大鼠感光細胞凋亡信號轉(zhuǎn)導通路的研究.pdf
- 生長因子對卵母細胞凋亡的抑制作用及其機制的實驗研究.pdf
- t-AUCB調(diào)控Hsp27相關信號通路并誘導膠質(zhì)母細胞瘤凋亡的機制研究.pdf
- 補腎法、疏肝法對小鼠卵母細胞BMP-15及其Smads信號通路影響的研究.pdf
- 牛卵丘-卵母細胞復合體凋亡發(fā)生和調(diào)控與其發(fā)育潛能關系研究.pdf
- 補腎法改善氧化應激提高重復COS卵母細胞線粒體功能與調(diào)控Nrf2信號通路的關系.pdf
- 咖啡因調(diào)控小鼠卵母細胞排卵后老化的研究.pdf
- 丙酮酸調(diào)控小鼠卵母細胞排卵后老化的研究.pdf
- 雌激素及其受體調(diào)控人卵母細胞發(fā)育的機制研究.pdf
- 卵母細胞成熟抑制劑對豬卵母細胞成熟的影響.pdf
- SIRT6調(diào)控Bax凋亡信號通路促進肝癌細胞凋亡逃逸.pdf
- P38MAPK信號通路調(diào)控乙醛刺激的大鼠肝星狀細胞增殖、凋亡及細胞周期的研究.pdf
- β-Arrestin調(diào)控細胞氧化應激凋亡中ASK1信號通路的研究.pdf
評論
0/150
提交評論