EGCG對山羊卵母細胞IVM，IVF的影響以及BMP15基因在山羊卵母細胞成熟過程的表達.pdf

1、卵母細胞或胚胎的體外培養(yǎng)時，比體內(nèi)的抗氧化劑水平低，因此卵母細胞或胚胎離開供體后不能得到母體抗氧化劑的保護。這也是制約體外培養(yǎng)效果的一個因素。本研究通過體外培養(yǎng)時添加抗氧化劑以提高體外培養(yǎng)的效果。EGCG是茶葉中的一種主要抗氧化物質(zhì)，它是天然的抗氧化劑，且無毒副作用。本實驗以山羊為動物模型采用TCM-199基礎(chǔ)培養(yǎng)體系，通過添加不同濃度的EGCG來研究其對由羊卵母細胞體外成熟，受精的影響。主要的研究結(jié)果如下：首先，在TCM-199基礎(chǔ)培

2、養(yǎng)液中添加0、10、15、20和25μM不同濃度的EGCG，并分析結(jié)果。發(fā)現(xiàn)當添加EGCG濃度為15μM時對山羊卵母細胞的成熟有明顯的促進作用，且差異顯著(p<0.05)。其次，在山羊卵母細胞成熟階段中添加EGCG濃度為15μM對后期成熟細胞受精也有明顯的促進作用，且差異顯著。 BMP15是卵母細胞分泌因子重要成員之一，其在卵泡發(fā)育和卵母細胞成熟過程中發(fā)揮重要作用。目前，有關(guān)BMP15的研究主要集中于人、綿羊、奶山羊、牛、豬等

3、，而在山羊中對于BMP15的研究主要限于多胎性方面的研究，尚未見有關(guān)山羊BMP15基因在山羊卵母細胞不同成熟階段表達的相關(guān)研究報道。因此，本文欲通過對山羊BMP15基因在卵母細胞成熟過程中的表達研究，探討B(tài)MP15在山羊生殖系統(tǒng)中所發(fā)揮的作用。 根據(jù)從NCBI上查閱山羊的BMP15基因序列來設計引物，以其PCR產(chǎn)物作為內(nèi)標，分別以山羊各個階段卵母細胞反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，通過半定量RT-PCR檢測了BMP15mRNA在山羊卵母細胞成

4、熟發(fā)育的不同階段的表達情況，通過熒光PCR檢測后發(fā)現(xiàn)BMP15在山羊卵母細胞成熟發(fā)育的不同階段中有不同的表最。發(fā)現(xiàn)該基因在未成熟卵母細胞中表達水平較低，在培養(yǎng)12h其表達豐度達到峰值，并與卵丘擴展時間相一致，隨后下降，推測BMP15可能在山羊卵丘細胞擴展中發(fā)揮重要作用。從而驗證了BMP15山羊在卵母細胞成熟發(fā)育過程中發(fā)揮著重要的作用。 采用免疫組化技術(shù)測定BMP15蛋白在性腺中的定位，結(jié)果顯示：BMP15在山羊卵巢初級卵泡、次級