不同化合物對(duì)鯉卵母細(xì)胞最終成熟相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、卵母細(xì)胞發(fā)育調(diào)控是魚(yú)類(lèi)生殖生理學(xué)的重要核心內(nèi)容。卵成活率的高低一直是評(píng)價(jià)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的一個(gè)主要的客觀因素，而卵母細(xì)胞最終成熟是卵子排出、成功受精的關(guān)鍵步驟。本研究采用卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)和熒光實(shí)時(shí)定量 PCR技術(shù)對(duì)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞最終成熟分子機(jī)制及相關(guān)內(nèi)分泌干擾物對(duì)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程影響的分子機(jī)制進(jìn)行了研究。主要結(jié)果如下：
　　1.分析了在不同化合物培養(yǎng)下卵母細(xì)胞發(fā)生GVBD的情況。結(jié)果表明，DHP可直接促進(jìn)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞的最終成熟

2、；DES可能為DHP類(lèi)似物，與DHP有著相似的作用，同樣可直接促進(jìn)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞的最終成熟；DEHP在單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞成熟有一定的抑制作用或沒(méi)有作用，但在加入DHP后，該抑制作用被很大的削弱。
　　2.運(yùn)用Bestkeeper、geNorm、NormFinder、RefFinder等軟件篩選了不同化合物暴露下卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因。結(jié)果表明，EF1α是DHP和DES誘導(dǎo)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中表達(dá)最穩(wěn)定的

3、基因；gapdh是DEHP誘導(dǎo)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中表達(dá)最穩(wěn)定的基因。經(jīng)各候選內(nèi)參基因分析LHR基因在DHP誘導(dǎo)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中的表達(dá)情況表明，在特定試驗(yàn)條件下，最佳內(nèi)參的篩選對(duì)于準(zhǔn)確分析目的基因表達(dá)非常重要。
　　3.研究了DHP、DES和DEHP對(duì)鯉魚(yú)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中涉及的一些相關(guān)基因表達(dá)的影響。1）cyp19、mPRγ、LHR、cdc2和cyclin B基因隨著DHP誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)，表達(dá)量顯著增加。20β-HSD

4、基因在整個(gè)DHP誘導(dǎo)過(guò)程中表達(dá)量都很低，IGFBP2基因表達(dá)量則隨著誘導(dǎo)時(shí)間的延長(zhǎng)表現(xiàn)為先增加后減少。2）在不同濃度DES誘導(dǎo)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中，0.1μmol/L DES除對(duì)cdc2和cyclin B基因表達(dá)無(wú)促進(jìn)作用，對(duì)其它幾個(gè)基因都有促進(jìn)作用。1μmol/L DES顯著誘導(dǎo)cyp19、LHR、mPRγ、cdc2、cyclin B和IGFBP2基因的表達(dá)。2μmol/L DES可促進(jìn)mPRγ、LHR、cyp19和IGFBP2的表

5、達(dá)。3）在不同濃度DEHP誘導(dǎo)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中，先加不同濃度DEHP，4h后加DHP培養(yǎng)時(shí)，DEHP單獨(dú)作用對(duì)所有基因都有抑制作用，DEHP濃度越高，該抑制作用越強(qiáng)，而在4h加入DHP后，這種抑制作用被減弱，轉(zhuǎn)而由DHP作為主導(dǎo)；DEHP和DHP共同存在時(shí)，DEHP對(duì)這些基因的抑制作用會(huì)相對(duì)減弱。
　　4.論文分析了DHP、DES和DEHP影響鯉魚(yú)卵母細(xì)胞最終成熟過(guò)程中一些基因的共表達(dá)關(guān)系。發(fā)現(xiàn)20β-HSD、mPRγ和LH