在體外成熟的不同階段凍融對(duì)卵母細(xì)胞成熟率和超微結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、目的：
　　 探討體外成熟過(guò)程中，分別在GV期和MII期凍融對(duì)卵母細(xì)胞成熟率和超微結(jié)構(gòu)的影響。
　　 方法：
　　 將獲得的GV期卵母細(xì)胞隨機(jī)分成A、B 兩組，A組是將卵母細(xì)胞在GV期慢速程序冷凍－快速解凍后體外培養(yǎng)到MII期；B組是將卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)到MII期后再慢速程序冷凍－快速解凍。冷凍的程序是從20℃開(kāi)始以-2℃/min 降至-7℃后人工植冰，再以-0.3℃/min的速度降至-30℃,然后以-50℃/mi

2、n的速度降至-150℃,最后直接投入液氮中(-196℃)。在光學(xué)顯微鏡下觀察兩組卵母細(xì)胞的形態(tài)，并分別計(jì)算各組的成熟率和復(fù)蘇率。選擇兩組中優(yōu)質(zhì)的MII期卵母細(xì)胞制作成電鏡標(biāo)本，在透射電鏡下觀察卵母細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。
　　 結(jié)果：
　　 B組卵母細(xì)胞的成熟率為71.4％，明顯高于A組(P<0.025)，但A、B兩組卵母細(xì)胞的復(fù)蘇率沒(méi)有顯著的差異性(P>0.05)。
　　 A、B兩組的卵母細(xì)胞透射電鏡觀察：A組卵母

3、細(xì)胞的線粒體散在分布在細(xì)胞的胞漿中，部分區(qū)域有聚集現(xiàn)象。線粒體大多數(shù)明顯的腫脹，呈圓形或者橢圓形，內(nèi)部可見(jiàn)橫形腫脹的嵴，部分線粒體的嵴顯示不清，線粒體基質(zhì)為較低密度的輪廓。B組卵母細(xì)胞的胞漿內(nèi)有大量的線粒體和空泡狀結(jié)構(gòu)，數(shù)量比A組的明顯增多，且集中分布在染色體的周?chē)＞€粒體周?chē)橛心遗?，直?.5-2.0um不等，內(nèi)含有絮狀或纖維狀的物質(zhì)，部分囊泡可見(jiàn)膜性結(jié)構(gòu)包裹。卵母細(xì)胞線粒體的周?chē)梢?jiàn)很多腫脹的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、囊泡和小管樣膜結(jié)構(gòu)復(fù)合物，它們

4、之間連接比較緊密。.A組卵母細(xì)胞的皮質(zhì)區(qū)皮質(zhì)顆粒分布不均，部分皮質(zhì)區(qū)域見(jiàn)1－2層排列較整齊的皮質(zhì)顆粒，在胞漿的其他區(qū)域也可見(jiàn)皮質(zhì)顆粒。B組卵母細(xì)胞的不僅皮質(zhì)區(qū)可以看到皮質(zhì)顆粒，而且在卵周間隙和微絨毛間隙也可見(jiàn)皮質(zhì)顆粒，總體上數(shù)量明顯少于A組。A組卵母細(xì)胞的胞膜表面可見(jiàn)突向透明帶的微絨毛，短粗狀，排列稀疏，數(shù)量較少。B組卵母細(xì)胞的微絨毛數(shù)量較A組明顯增多，呈細(xì)長(zhǎng)狀，有倒伏的現(xiàn)象。
　　 結(jié)論：
　　 在GV期卵母細(xì)胞的凍融