體外成熟過(guò)程中綿羊卵母細(xì)胞組蛋白乙酰化和山羊卵母細(xì)胞線粒體的動(dòng)態(tài)變化.pdf

1、卵母細(xì)胞是生命延續(xù)之本，卵母細(xì)胞的成熟是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程。大多數(shù)哺乳動(dòng)物的卵母細(xì)胞的減數(shù)分裂開(kāi)始于胚胎早期，在出生前后分裂至雙線期便進(jìn)入休止期。在體外培養(yǎng)的環(huán)境中，從卵巢卵泡內(nèi)獲得的長(zhǎng)足卵母細(xì)胞自發(fā)的恢復(fù)第一次減數(shù)分裂逐步成熟，期間的標(biāo)志性事件是：生發(fā)泡的破裂，染色質(zhì)的凝集，紡錘體的組裝，第一極體的排放。完成第一次減數(shù)分裂后至受精前，卵母細(xì)胞停滯在第二次減數(shù)分裂期。受精后，卵母細(xì)胞排出第二極體完成第二次減數(shù)分裂。在卵母細(xì)胞內(nèi)雌雄原核形成并

2、且發(fā)生變化，開(kāi)始早期的胚胎發(fā)育。 卵母細(xì)胞的成熟是一個(gè)及其復(fù)雜的變化過(guò)程，分為核成熟和胞質(zhì)成熟兩大基本過(guò)程。卵丘細(xì)胞、透明帶、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核發(fā)生一系列的結(jié)構(gòu)和分子方面的變化，完成卵丘細(xì)胞的擴(kuò)散、核的成熟和胞質(zhì)的成熟。在胞質(zhì)成熟方面，如線粒體的激活與遷移、遺傳物質(zhì)等細(xì)胞器以及細(xì)胞內(nèi)的生化物質(zhì)也隨著改變，從而保障胚胎的早期發(fā)育。最后卵泡破裂排出具備受精和發(fā)育能力卵母細(xì)胞。 實(shí)驗(yàn)一綿羊卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中組蛋白乙?；膭?dòng)態(tài)變

3、化組蛋白乙?；诓煌?lèi)型的細(xì)胞發(fā)育過(guò)程中存在不同的變化，甚至在不同動(dòng)物的同一類(lèi)型細(xì)胞中的變化也存在一定的差別。在綿羊卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中，為了探討組蛋白H3/K9、H4/K5和H4/K12乙?；脑敿?xì)變化規(guī)律，我們應(yīng)用H3/K9、H4/K5和H4/K12的抗體分別檢測(cè)，并通過(guò)核磁激光共聚焦顯微鏡進(jìn)行觀測(cè)研究。試驗(yàn)結(jié)果：H3/K9和H4/K12在生發(fā)泡期、生發(fā)泡晚期以及生發(fā)泡破裂期染色質(zhì)的抗體表達(dá)顯著，在第一次減數(shù)分裂中期的抗體表達(dá)減弱

4、；但是隨著卵母細(xì)胞進(jìn)一步發(fā)育到中后期和第二次減數(shù)分裂中期，抗體的表達(dá)又變強(qiáng)，并且在第一極體中可以檢測(cè)到抗體的存在。H4/K5的抗體表達(dá)最早出現(xiàn)在第一次減數(shù)分裂中期，隨著細(xì)胞發(fā)育到中后期其表達(dá)效應(yīng)加強(qiáng)；但是發(fā)育到第二次減數(shù)分裂中期，卵母細(xì)胞及第一極體中H4/K5的抗體表達(dá)不明顯，甚至檢測(cè)不到。 實(shí)驗(yàn)二山羊卵母細(xì)胞體外成熟過(guò)程中線粒體的動(dòng)態(tài)分布應(yīng)用激光共聚焦掃描技術(shù)，研究山羊卵母細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程中線粒體的動(dòng)態(tài)分布。收集的山羊卵母細(xì)胞

5、在M199中分別培養(yǎng)4h、8h、12h、16h、20h和24h，用特異性線粒體標(biāo)記探針(Mito Tracker Green，綠色)進(jìn)行標(biāo)記，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察線粒體的分布情況。結(jié)果表明：生發(fā)泡(germinal vesicle，GV)期線粒體多分散在卵母細(xì)胞的胞質(zhì)內(nèi)，并且距生發(fā)泡有一定的距離；生發(fā)泡破裂(germinal vesicle breakdown，GVBD)期線粒體逐漸移向染色質(zhì)；第一次減數(shù)分裂中期(MⅠ)與第二次減