Cdc2基因在絨山羊卵母細(xì)胞體外成熟過程中表達(dá)情況的研究.pdf

1、后期促進(jìn)復(fù)合物或周期體(The anaphase-promoting complex orcyclosome，APC/C)是一個(gè)泛素連接酶復(fù)合體，它控制著細(xì)胞分裂的中期向后期的轉(zhuǎn)換。在細(xì)胞中期，當(dāng)染色體與紡錘絲正確連接時(shí)，Cdc20激活A(yù)PC/C，進(jìn)而啟動(dòng)一系列泛素化反應(yīng)，染色體開始分離。這是一個(gè)保證細(xì)胞有絲分裂正常進(jìn)行的重要機(jī)制。同樣，其在減數(shù)分裂中也有著相同的作用。本研究中，我們分析了體外培養(yǎng)的卵母細(xì)胞中的Cdc20的表達(dá)情況，并對(duì)

2、Cdc20進(jìn)行了表達(dá)調(diào)控。我們構(gòu)建了Myc-Cdc20載體，在將載體反轉(zhuǎn)錄成為cRNA之后通過顯微注射的方法進(jìn)行Cdc20的過量表達(dá)。此外，我們還通過western blot的方法檢測(cè)了正常體外培養(yǎng)條件下的GV、GVBD、MⅠ和MⅡ期卵母細(xì)胞的Cdc20的表達(dá)情況。
　　首先，我們確定了在本實(shí)驗(yàn)室體外培養(yǎng)條件下的絨山羊卵母細(xì)胞成熟率和細(xì)胞到達(dá)GVBD、MⅠ和MⅡ期所需的時(shí)間。結(jié)果顯示，在我們的培養(yǎng)條件下，卵母細(xì)胞成熟率為75％。8

3、小時(shí)，卵母細(xì)胞發(fā)生GVBD，18小時(shí)到達(dá)MⅠ期，24小時(shí)后，有75％的卵母細(xì)胞排出第一極體，到達(dá)MⅡ期。
　　然后，我們將Myc-Cdc20 cRNA注射到到卵母細(xì)胞并進(jìn)行體外培養(yǎng)，10小時(shí)后，我們檢測(cè)到了MYC-CDC20融合蛋白的表達(dá)。但是，成熟時(shí)間和成熟率與正常條件下的體外培養(yǎng)并無差異性顯著。我們通過western blot的方法檢測(cè)了正常培養(yǎng)條件下的絨山羊卵母細(xì)胞GV期到MⅡ期CDC20蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果表明從GV期到M