人牙髓細胞在體外增殖和分化潛能的實驗研究.pdf

1、保存牙髓活力是牙髓生物學基礎研究的主要內(nèi)容和牙髓病治療學發(fā)展的主要目標。隨著分子生物學、組織工程學、細胞生物學等相關學科的發(fā)展，牙本質(zhì)-牙髓復合體的再生已展示出誘人的應用前景和科學價值。 本實驗通過體外培養(yǎng)hDPCs，觀察hDPCs在離體牙髓腔內(nèi)生長和分化情況，以及EDMPs對hDPCs增殖和分化的影響，以期為組織工程化牙髓的研制提供實驗依據(jù)。 第一部分:人牙髓細胞體外培養(yǎng) 材料和方法:收集因正畸需要新鮮拔除的前

2、磨牙(18～30歲)，無菌條件下劈冠取出牙髓，采用組織塊酶解法進行hDPCs的原代培養(yǎng)。傳代時制取細胞爬片，通過HE染色來觀察細胞形態(tài)，同時采用細胞免疫化學染色對細胞來源進行鑒定。另外，通過連續(xù)8d細胞計數(shù)描繪細胞生長曲線。 結論：實驗證實該細胞為hDPCs，體外培養(yǎng)生長穩(wěn)定，為下一步實驗奠定基礎。 第二部分:人牙髓細胞在離體牙髓腔內(nèi)生長和分化的研究 材料和方法:收集新鮮拔除的無齲后牙，截取牙冠，慢球鉆去除髓腔內(nèi)

3、壁的前期牙本質(zhì)層，經(jīng)10％EDTA、19％檸檬酸、75％乙醇處理后接種hDPCs，培養(yǎng)2周后4％多聚甲醛固定，10％甲酸脫鈣約20 d后脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，進行HE染色和Masson三色法染色，顯微鏡下觀察。 結論通過體外培養(yǎng)，hDPCs在牙本質(zhì)表面可以表現(xiàn)為成牙本質(zhì)細胞樣細胞的形態(tài)，為組織工程化牙髓的研制提供參考。 第三部分:牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白對人牙髓細胞增殖和分化的影響 材料和方法:取生長穩(wěn)定的第3～5

4、代細胞，制備成細胞懸液后接種至96孔板，分別加入含EDMPs的培養(yǎng)液、礦化誘導液和普通培養(yǎng)液，利用MTT比色法連續(xù)8d檢測hPCs的增殖情況；另取生長穩(wěn)定的第3～5代細胞，制備成細胞懸液后接種至25mL培養(yǎng)瓶，分別加入舍EDMPs10ug/mL、含EDMPs1 ug/mL的培養(yǎng)液、礦化誘導液和普通培養(yǎng)液，培養(yǎng)3周后茜素紅染色，觀察hDPCs的礦化情況。 結論 EDMPs對體外培養(yǎng)的hDPCs的增殖和分化有一定的作用，為進一步探討