兔牙髓細(xì)胞體外增殖及鑒定的實驗研究.pdf

1、目的：體外分離培養(yǎng)兔牙髓細(xì)胞，研究兔牙髓細(xì)胞體外增殖特性及表面標(biāo)志物的鑒定。
　　方法：酶解組織塊法培養(yǎng)兔牙髓原代細(xì)胞，有限稀釋化克隆培養(yǎng)兔傳代細(xì)胞，顯微鏡下觀察原代細(xì)胞及傳代細(xì)胞形態(tài)變化。取第3-6代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞活率的檢測。取2代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞克隆計數(shù)。取第2、4、6、8、10代細(xì)胞繪制生長曲線。流式細(xì)胞儀對第2、4、6、8、10代細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞周期的檢測。取第2代細(xì)胞進(jìn)行牙髓干細(xì)胞表面標(biāo)志物vimentin、CD44、osteon

2、ectin、DSP的鑒定。
　　結(jié)果：采用酶解組織塊法培養(yǎng)的兔原代牙髓細(xì)胞、有限稀釋化克隆培養(yǎng)的兔牙髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)無明顯差異。從第3代到第6代細(xì)胞活率細(xì)胞數(shù)比分別為：94.7％、95.8%、95.2%、95.3%。兔牙髓細(xì)胞克隆形成率為8-26個/2000個細(xì)胞。不同代細(xì)胞之間增殖率有差異，LSD-t檢驗示第2、4和6代DPCs間無統(tǒng)計學(xué)差異，第8代和10代DPCs與其他各代細(xì)胞之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。隨著細(xì)胞傳代，s期細(xì)胞比例增

3、加。LSD-t檢驗示第2、4和6代DPCs的各期細(xì)胞比例無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，第8和10代DPCs與其他各代細(xì)胞之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。牙髓干細(xì)胞表面標(biāo)志物 vimentin、CD44、osteonectin、DSP均為陽性。
　　結(jié)論：體外分離培養(yǎng)的兔牙髓細(xì)胞具有較強(qiáng)的增殖活性、免疫細(xì)胞化學(xué)vimentin、CD44、osteonectin、DSP均為陽性表達(dá)，證實兔牙髓細(xì)胞可分離培養(yǎng)出牙髓干細(xì)胞，為牙組織工