少突膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)純化及鑒定、細(xì)胞體外缺氧模型建立.pdf

1、目的: 1、觀察體外培養(yǎng)少突膠質(zhì)細(xì)胞的增殖和分化，觀察其生物學(xué)特性；探討獲得細(xì)胞純度較高的實(shí)驗(yàn)方法，為少突膠質(zhì)細(xì)胞損傷后髓鞘形成障礙或脫髓鞘疾病的研究奠定基礎(chǔ)。 2、建立體外少突膠質(zhì)細(xì)胞缺氧培養(yǎng)模型。 方法: 1、取新生SD大鼠腦皮質(zhì)進(jìn)行體外培養(yǎng)，根據(jù)星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)時(shí)間差異、細(xì)胞生長(zhǎng)方式及細(xì)胞對(duì)培養(yǎng)層粘附等特性的不同，采用兩次恒溫?fù)u床振蕩分離純化法和條件限定培養(yǎng)基培養(yǎng)，倒置顯微鏡結(jié)合免疫熒

2、光染色法鑒定細(xì)胞種類并判斷純度。 2、缺氧聯(lián)合低糖培養(yǎng)建立細(xì)胞體外缺氧培養(yǎng)模型，透射電鏡觀察細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。 結(jié)果: 1、獲取高純度的大鼠少突膠質(zhì)細(xì)胞。少突膠質(zhì)前體細(xì)胞祖細(xì)胞A285陽(yáng)性，成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞半乳糖腦苷脂陽(yáng)性。 2、缺氧培養(yǎng)2小時(shí)細(xì)胞變化不明顯，但缺氧培養(yǎng)6小時(shí)，細(xì)胞存活率明顯下降，并且隨著缺氧時(shí)間延長(zhǎng)存活細(xì)胞更少，凋亡細(xì)胞更多，至缺氧培養(yǎng)10小時(shí)，大多數(shù)細(xì)胞破碎。 結(jié)論: 1、