微囊化兔雪旺細胞體外培養(yǎng)及相關研究.pdf

1、目的：探討從成年大白兔周圍神經(jīng)分離、純化、培養(yǎng)獲取大量雪旺細胞的有效手段，觀察微囊化兔雪旺細胞體外培養(yǎng)過程中的形態(tài)與增殖特征，為神經(jīng)損傷后修復提供實驗基礎。 方法：利用成年兔發(fā)生Wallerian變性的雙側坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后反復差速貼附法進行培養(yǎng)，快速分離純化雪旺細胞，通過相差顯微鏡下觀察雪旺細胞狀態(tài)計數(shù)和S-100細胞免疫組化染色相結合鑒定，觀察其生長并繪制生長曲線，按照細胞倍增時間公式計算其倍增時間。隨后，海藻酸鈉．氯化鋇一

2、步成囊法包裹生長良好的第三代雪旺細胞，繼續(xù)培養(yǎng)觀察，運用MTI、法測定微囊包裹的雪旺細胞和單純雪旺細胞的增殖反應。 結果：發(fā)現(xiàn)利用發(fā)生Wallerian變性后的兔雙側坐骨神經(jīng)，經(jīng)改良后差速貼壁培養(yǎng)方法能夠明顯抑制成纖維細胞的生長，獲得大量雪旺細胞，經(jīng)S-100蛋白免疫組化鑒定，雪旺細胞純度達95％以上，細胞數(shù)量達1×10<'6>／ml以上：繪制其生長曲線，并計算得出體外培養(yǎng)的第三代雪旺細胞體外倍增時間為3d：MTT。實驗檢測：經(jīng)