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文檔簡介
1、研究目的: 應用共培養(yǎng)方法體外誘導脂肪來源干細胞(ADSCs)向表皮干細胞(ESCs)分化,探討其作為組織工程化皮膚種子細胞的可行性。 研究方法: 1.選用兔齡3~4月大白兔,用貼壁法及Ⅰ型膠原酶法從脂肪組織中分離出細胞,進行體外長期傳代及大量增殖培養(yǎng),并觀察及檢測其生物學特性,以鑒定所培養(yǎng)細胞為脂肪來源干細胞(ADSCs)。 2.復蘇人HaCaT細胞株,并體外擴增培養(yǎng)。 3.實驗分組:①共培養(yǎng)3
2、天的ADSCs;②共培養(yǎng)7天的ADSCs;③第三代ADSCs。采用插入式細胞培養(yǎng)器(Transwell)與六孔板來構建體外共培養(yǎng)模型,將HaCaT細胞和ADSCs分別種于上室和下室內(nèi)進行共培養(yǎng)。對共培養(yǎng)后的ADSCs進行形態(tài)學觀察鑒定,對3組細胞進行角蛋白K19,Pan-CK和β1整合素三個指標的免疫細胞學檢測,并用SPSS15.0進行統(tǒng)計學分析。 研究結果: 1.ADSCs生物學特性:①原代及傳代的兔ADSCs均呈長梭
3、形或三角形貼壁生長,形態(tài)與骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)相似。②傳代的兔ADSCs生長曲線呈“S”形,群體倍增時間為22h~25h。③免疫細胞化學檢測CD29, CD44表達陽性;而CD34, CD45表達陰性。 2.共培養(yǎng)后的ADSCs:①在形態(tài)上,共培養(yǎng)后的ADSCs細胞體積變大,橫徑變粗,由原來的細長梭型變成粗長梭型或短棒狀,形態(tài)向表皮細胞系轉(zhuǎn)化,并處于未成熟期;②在免疫細胞化學檢測中,共培養(yǎng)后的ADSCs均表達角蛋白K1
4、9, Pan-CK和β1整合素陽性,共培養(yǎng)7天的較共培養(yǎng)3天的ADSCs表達抗體陽性率增高,且具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結果表明共培養(yǎng)后的ADSCs為第三代ADSCs、表皮干細胞(ESCs)和暫時增殖細胞(TA細胞)的混合體。 研究結論: 1.膠原酶消化法可以獲得純度較高的ADSCs。 2.兔ADSCs與人HaCaT細胞體外共培養(yǎng),可誘導向ESCs分化。 3.用Transwell體外構建HaCaT與
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