地塞米松對(duì)人牙齦上皮細(xì)胞表達(dá)β-防御素的影響及其信號(hào)通路研究.pdf

1、目的:通過(guò)檢測(cè)地塞米松(Dex)對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的人牙齦上皮細(xì)胞(HGECs)表達(dá)β-防御素-1，2(hBD-1、hBD-2)和炎癥因子IL-1β、IL-6的影響及核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）和絲裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)等相關(guān)信號(hào)通路蛋白的活化情況，探討地塞米松對(duì)口腔上皮免疫的影響及作用機(jī)制。
　　方法:1.將臨床取材的正常

2、人牙齦組織采用酶消化培養(yǎng)法獲取原代牙齦上皮細(xì)胞。選用10ng/ml TNF-α誘導(dǎo)第三代牙齦上皮細(xì)胞24h。另一組選用p38MAPK抑制劑或NF-κB抑制劑分別孵育細(xì)胞2h后，再用10ng/ml TNF-α誘導(dǎo)細(xì)胞24h。提取細(xì)胞總RNA檢測(cè)hBD-2 mRNA的表達(dá)量。
　　2.不同濃度Dex(0.1，1，10μ M/L)分別培養(yǎng)第三代HGEC2h后再加入10ng/ml TNF-α誘導(dǎo)細(xì)胞24h。取貼壁細(xì)胞用于提取總RNA進(jìn)行實(shí)

3、時(shí)熒光定量PCR(Real Time-PCR)檢測(cè)hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA的表達(dá)。取貼壁細(xì)胞用于提取細(xì)胞總蛋白行WesternBlot(WB)檢測(cè)p-p65NF-κB、p65NF-κB和p-p38MAPK、p38MAPK蛋白的活化程度以及p65NF-κB蛋白的核轉(zhuǎn)位情況。所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±s）表示，多組間比較采用

4、方差分析，兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn);以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.10ng/mlTNF-α能誘導(dǎo)HGECs hBD-2 mRNA表達(dá)量明顯升高。而在p38MAPK或NF-κB抑制劑存在的情況下，10ng/ml TNF-α誘導(dǎo)的HGECs hBD-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P＜0.05）。
　　2.Dex對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HGECs表達(dá)hBD-1 mRNA、hBD-2 mRNA、IL-1βmRNA

5、、IL-6 mRNA的影響。各組間HGECs hBD-1 mRNA相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05）。TNF-α能誘導(dǎo)HGECshBD-2 mRNA、IL-1β mRNA、IL-6 mRNA表達(dá)量升高(P＜0.05);在1、10μ M/L Dex存在下，TNF-α誘導(dǎo)的HGECs hBD-2 mRNA相對(duì)表達(dá)量下降（P＜0.05）;0.1、10μ M/L Dex也能使TNF-α能誘導(dǎo)的IL-1βmRNA相對(duì)表達(dá)量下

6、降(P＜0.05);0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α能誘導(dǎo)的IL-6 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P＜0.05)。
　　3.不同濃度Dex對(duì)TNF-α誘導(dǎo)的HGECs hBD-2 mRNA表達(dá)的通路蛋白活化情況。10ng/mlTNF-α能使HGECs p65NF-κB、p38MAPK通路蛋白明顯激活，p-p65NF-κB、p-p38MAPK蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯升高(P＜0.05)。在1、10μ M/L Dex的存

7、在下，TNF-α誘導(dǎo)的HGECs p-p65NF-κB蛋白相對(duì)表達(dá)量降低(P＜0.05)。而0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α能誘導(dǎo)的HGEC p-p38MAPK相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P＜0.05)，且隨著Dex濃度的逐漸升高p-p38MAPK蛋白相對(duì)表達(dá)量也逐漸下降。
　　4.TNF-α能誘導(dǎo)p65NF-κB蛋白在HGECs核內(nèi)表達(dá)明顯升高，0.1、1、10μ M/L Dex均能使TNF-α誘導(dǎo)的p65NF-κB在