參蘇飲對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞β-防御素-2的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　探索參蘇飲對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞β-防御素-2的影響及其與TLR4—NFκB信號(hào)通路的相關(guān)性。
　　方法：
　　1.選擇雄性SD大鼠，灌胃給予參蘇飲及其拆方藥液，心臟采血制備含藥血清；
　　2.傳代培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）；
　　3.LPS（1mg/L）刺激16HBE后不同時(shí)間點(diǎn)（3h、6h、12h、24h）測(cè)定細(xì)胞增殖活性及培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-8含量，建立16HBE炎癥模型；<

2、br>　　4.采用WB法檢測(cè)給藥后不同時(shí)間點(diǎn)（3h、8h）細(xì)胞hBD-2蛋白的表達(dá)情況；
　　5.采用RT-PCR法檢測(cè)給藥后不同時(shí)間點(diǎn)（0.5h、1h、3h、5h、8h）細(xì)胞TLR4mRNA、NFκBp65mRNA、hBD-2mRNA的表達(dá)情況；
　　6.采用濾板法檢測(cè)給藥后不同時(shí)間點(diǎn)（0.5h、1h、3h、5h、8h）細(xì)胞 NFkB的激活情況。
　　結(jié)果：
　　1.成功培養(yǎng)了人支氣管上皮細(xì)胞（16HBE）16

3、HBE細(xì)胞為多邊形，形態(tài)不規(guī)則，呈鋪路石樣單層貼壁生長(zhǎng)；一般3～5天傳代一次，3～4h開始貼壁，進(jìn)而出現(xiàn)分裂相，分裂呈團(tuán)簇狀并逐漸拉網(wǎng)連接成片。
　　2.成功建立了16HBE炎癥模型LPS（1mg/L）刺激細(xì)胞12h時(shí)，細(xì)胞增殖較快且上清液中IL-8及TNF-α含量較正常對(duì)照組均有顯著性差異（P<0.01）。
　　3.參蘇飲對(duì)16HBE hBD-2蛋白的影響與模型組比較，全方組、益氣解表組、止咳化痰組在3h、8h均能顯著性（

4、P<0.05）上調(diào)hBD-2蛋白含量。
　　4.參蘇飲對(duì)16HBE hBD-2mRNA、NFκBp65mRNA、TLR4mRNA的影響與模型組比較：全方組及益氣解表組hBD-2mRNA相對(duì)表達(dá)量在1h、3h、5h均顯著性升高（P<0.05），且在3h達(dá)峰值；止咳化痰組hBD-2mRNA相對(duì)表達(dá)量?jī)H在1h、5h顯著性升高（P<0.05）；全方組、益氣解表組、止咳化痰組NFκBp65mRNA相對(duì)表達(dá)量在3h、5h顯著性升高（P<0.0

5、5）；全方組、益氣解表組TLR4mRNA相對(duì)表達(dá)量在3h、5h、8h顯著性升高（P<0.05）；止咳化痰組TLR4mRNA相對(duì)表達(dá)量在5h、8h顯著性升高（P<0.05）。
　　5.參蘇飲對(duì)16HBE NFκB活性的影響與模型組比較，全方組、益氣解表組、止咳化痰組NFκB蛋白活性在1h、3h、5h、8h顯著性升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　參蘇飲能上調(diào)人支氣管上皮細(xì)胞表達(dá)β-防御素-2，其上調(diào)通路與TLR4—N