柴油機(jī)廢氣顆粒對(duì)人正常支氣管上皮細(xì)胞miR-21的影響及潛在致癌機(jī)制.pdf

1、目的:
　　空氣污染是導(dǎo)致肺部疾患的重要原因。柴油機(jī)廢氣是空氣污染的重要來源。本研究是將柴油機(jī)廢氣作用于正常支氣管上皮細(xì)胞和肺腺癌細(xì)胞，從miR-21表達(dá)量的變化初步探討柴油機(jī)廢氣是否促進(jìn)腫瘤發(fā)生及其機(jī)制。
　　方法:
　　本研究以正常人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)和肺腺癌細(xì)胞A549為研究對(duì)象，miR-21為研究指標(biāo)。先提取正常未處理人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE及A549細(xì)胞中總RNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR

2、-21在兩種細(xì)胞中表達(dá)的差別，然后將柴油機(jī)廢氣顆粒溶解于1640培養(yǎng)基至濃度為100μg/ml，后加入待研究人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE，處理48小時(shí)后并提取細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)miR-21在未處理及經(jīng)48小時(shí)柴油機(jī)廢氣顆粒處理的人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE中表達(dá)量的變化，用Western blot檢測(cè)在上述細(xì)胞中PTEN、PI3K、AKT、p-AKT的表達(dá)量的變化。柴油機(jī)廢氣顆粒聯(lián)合miR-21的反義寡核苷酸

3、（As-miR-21）作用后再次對(duì)以上指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，以分析miR-21在柴油機(jī)廢氣顆粒致癌過程的潛在作用。檢測(cè)人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE和肺腺癌細(xì)胞A549經(jīng)柴油機(jī)廢氣顆粒處理48小時(shí)后遷移，侵襲及周期凋亡的變化，用劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞遷移能力，Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期和凋亡變化。
　　結(jié)果:
　　未處理肺腺癌細(xì)胞A549中miR-21的表達(dá)量較未處理人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE中的表

4、達(dá)量明顯上升，PTEN表達(dá)量較低，而PI3K，AKT, p-AKT的表達(dá)量均較人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE中升高，且有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。加入柴油機(jī)廢氣顆粒后的人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE處理組miR-21的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組。PTEN，PI3K，AKT，p-AKT的表達(dá)量也出現(xiàn)上述變化，而當(dāng)柴油機(jī)廢氣顆粒聯(lián)合miR-21的反義寡核苷酸處理人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE后，miR-21的表達(dá)量較對(duì)照組下降，PTEN表達(dá)

5、量上升，逆轉(zhuǎn)了柴油機(jī)廢氣顆粒作用引起的PTEN表達(dá)量下降趨勢(shì)，而PI3K和AKT的表達(dá)也表現(xiàn)出逆轉(zhuǎn)趨勢(shì)，明顯下降。結(jié)果也顯示，加入柴油機(jī)廢氣顆粒的16HBE和A549細(xì)胞的遷移能力均下降，增殖能力均下降，細(xì)胞周期均阻滯于G0/G1期，人正常支氣管上皮細(xì)胞16HBE凋亡率增加而肺腺癌細(xì)胞A549未見有意義變化，A549細(xì)胞侵襲能力稍有增強(qiáng)，16HBE侵襲能力下降。
　　結(jié)論:
　　miR-21的上升可能在可能致癌物柴油機(jī)廢氣顆