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文檔簡介
1、目的:
建立可靠的人支氣管上皮細胞原代培養(yǎng)方法及鑒定技術(shù)。
方法:
手術(shù)切除的新鮮肺組織,去除支氣管外的其他組織,保留主支氣管和小的支氣管,使用PBS液充分沖洗后,去除多次的連接組織和淋巴結(jié),只保留氣管軟組織,并剪成1×1cm大小的碎片,加入含蛋白酶XIV的消化液中,4℃過夜消化,收集細胞懸液,接種在包被好TypeⅠ/Ⅲ膠原的培養(yǎng)瓶中,無血清培養(yǎng)基進行原代培養(yǎng)。通過倒置顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行鑒
2、定。
結(jié)果:
1.蛋白酶XIV消化分離支氣管上皮細胞可獲得較多單個支氣管上皮細胞,HE染色可見纖毛細胞、基細胞。
2.分離的支氣管上皮細胞在無血清培養(yǎng)基中生長良好,1天后細胞逐漸貼壁,細胞小,分布均勻,多成圓形;3-4天后細胞開始逐漸變大、呈多邊形;7-10天生長旺盛,可見成片的扁平狀、多邊形,呈鋪路鵝卵石樣分布生長。10天后生長緩慢、停止生長,細胞逐漸老化,出現(xiàn)空泡。
3.兔抗人的角蛋白8單克隆
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