人支氣管上皮細(xì)胞的獲取與培養(yǎng).pdf

1、目的:
　　建立可靠的人支氣管上皮細(xì)胞原代培養(yǎng)方法及鑒定技術(shù)。
　　方法:
　　手術(shù)切除的新鮮肺組織，去除支氣管外的其他組織，保留主支氣管和小的支氣管，使用PBS液充分沖洗后，去除多次的連接組織和淋巴結(jié)，只保留氣管軟組織，并剪成1×1cm大小的碎片，加入含蛋白酶XIV的消化液中，4℃過夜消化，收集細(xì)胞懸液，接種在包被好TypeⅠ/Ⅲ膠原的培養(yǎng)瓶中，無血清培養(yǎng)基進(jìn)行原代培養(yǎng)。通過倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒

2、定。
　　結(jié)果:
　　1.蛋白酶XIV消化分離支氣管上皮細(xì)胞可獲得較多單個(gè)支氣管上皮細(xì)胞，HE染色可見纖毛細(xì)胞、基細(xì)胞。
　　2.分離的支氣管上皮細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好，1天后細(xì)胞逐漸貼壁，細(xì)胞小，分布均勻，多成圓形;3-4天后細(xì)胞開始逐漸變大、呈多邊形;7-10天生長(zhǎng)旺盛，可見成片的扁平狀、多邊形，呈鋪路鵝卵石樣分布生長(zhǎng)。10天后生長(zhǎng)緩慢、停止生長(zhǎng)，細(xì)胞逐漸老化，出現(xiàn)空泡。
　　3.兔抗人的角蛋白8單克隆