人支氣管上皮細(xì)胞5—脂氧合酶表達(dá)與丙烯腈的活化及細(xì)胞毒性.pdf

1、[目的]結(jié)合能肯定大豆脂氧合酶(SLO)介導(dǎo)丙烯腈(ACN)氧化反應(yīng)的體外酶系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)與丙烯腈對HBE5-LOX蛋白表達(dá)、細(xì)胞毒性和DNA損傷影響的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究,初步探討細(xì)胞內(nèi)5-LOX對外源化學(xué)物的代謝情況,試圖為LOX作為細(xì)胞色素P450氧化代謝外源化合物的替代途徑提供進(jìn)一步的依據(jù)。
　　 [方法]體外酶系統(tǒng)實(shí)驗(yàn):在適宜條件下,SLO與丙烯腈等在酶體系中開始反應(yīng)后,用分光光度法在特定波長檢測反應(yīng)體系中反應(yīng)終產(chǎn)物生成情況,并計(jì)算

2、SLO對丙烯腈氧化代謝速率和茶多酚對代謝的抑制率。
　　 細(xì)胞實(shí)驗(yàn):通過MTT試驗(yàn)檢測不同濃度的丙烯腈對HBE存活率的影響,分別以不同濃度的丙烯腈染毒HBE12小時(shí),用western-blot印記法檢測各組5-LOX蛋白表達(dá)的情況:同時(shí)用單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測各組的DNA損傷情況。最后檢測特異性5-LOX抑制劑(AA861)對5-LOX蛋白表達(dá)和多種特異性酶抑制劑對DNA損傷的影響。
　　 [結(jié)果]在過氧化氫參與下,SL

3、O可以協(xié)同氧化丙烯腈,氧化后生成2-氰環(huán)氧乙烷(CEO)。LOX抑制劑茶多酚可抑制該協(xié)同氧化作用,且在一定范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。丙烯腈可以使HBE內(nèi)5-LOX蛋白表達(dá)增加,AA-861對5-LOX蛋白表達(dá)基本沒有影響；丙烯腈可以對HBE產(chǎn)生明顯細(xì)胞毒作用和DNA損傷,AA-861和萘普生可以明顯抑制丙烯腈毒性和DNA損傷情況。
　　 [結(jié)論]在過氧化氫參與下,SLO可以介導(dǎo)丙烯腈協(xié)同氧化,茶多酚可以抑制該協(xié)同氧化作用。5-LOX