人支氣管上皮細(xì)胞5-脂氧合酶介導(dǎo)的苯并(a)芘的活化及其細(xì)胞毒性.pdf

1、[目的]通過(guò)大豆脂氧合酶(SLO)介導(dǎo)苯并(a)芘(B[a]P)氧化反應(yīng)的體外酶系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)與苯并(a)芘對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(HBE)5-脂氧合酶（5-LOX）蛋白表達(dá)、細(xì)胞毒性和DNA損傷影響的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究，初步探討細(xì)胞內(nèi)5-LOX對(duì)苯并(a)芘的代謝活化情況，試圖為L(zhǎng)OX作為細(xì)胞色素P450氧化代謝外源化學(xué)物的替代途徑提供進(jìn)一步的參考依據(jù)。
　　 [方法]體外酶系統(tǒng)實(shí)驗(yàn)：SLO與苯并(a)芘等在酶體系中進(jìn)行反應(yīng)后，用分光光度法于

2、特定波長(zhǎng)下檢測(cè)反應(yīng)體系中反應(yīng)產(chǎn)物生成情況，并計(jì)算SLO對(duì)苯并(a)芘氧化代謝速率及脂氧合酶抑制劑茶多酚(GTP)對(duì)氧化的抑制率。同時(shí)用紫外分光光度計(jì)及高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)苯并(a)芘與DNA的加合物。
　　 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：以不同濃度的苯并(a)芘染毒HBE，通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同濃度苯并(a)芘對(duì)HBE存活率的影響；用western-blot印記法檢測(cè)各組5-LOX蛋白表達(dá)的情況；同時(shí)用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)及單細(xì)胞凝膠電泳實(shí)驗(yàn)檢測(cè)

3、各組的細(xì)胞毒性及DNA損傷情況。最后檢測(cè)特異性5-LOX抑制劑(AA-861)及其他特異性酶抑制劑對(duì)5-LOX蛋白表達(dá)和對(duì)DNA損傷的影響。
　　 [結(jié)果]體外酶系統(tǒng)中，過(guò)氧化氫(H202)參與下，SLO可介導(dǎo)苯并(a)芘協(xié)同氧化生成苯并(a)芘-7，8-環(huán)氧化物；抑制劑GTP可抑制該氧化反應(yīng)，且在一定范圍內(nèi)呈劑量效應(yīng)關(guān)系。SLO介導(dǎo)苯并(a)芘活化后，在體外未能檢測(cè)到與DNA形成加合物。苯并(a)芘可以使HBE內(nèi)5-LOX蛋白

4、表達(dá)增加，AA-861對(duì)5-LOX蛋白表達(dá)基本沒(méi)有影響；苯并(a)芘可以對(duì)HBE產(chǎn)生明顯細(xì)胞毒作用和DNA損傷，AA-861和前列腺素合酶抑制劑萘普生可以明顯抑制苯并(a)芘毒性和DNA損傷。
　　 [結(jié)論]H2O2參與下，SLO可以介導(dǎo)苯并(a)芘協(xié)同氧化，抑制劑GTP可以抑制該協(xié)同氧化反應(yīng)。5-LOX在HBE內(nèi)的蛋白表達(dá)可以經(jīng)苯并(a)芘調(diào)節(jié)，特異性5-LOX抑制劑AA-861對(duì)其蛋白表達(dá)無(wú)明顯影響。在HBE內(nèi)，苯并(a)芘