不同抗生素對(duì)支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)流感嗜血桿菌抗菌作用的影響.pdf

1、研究背景：
　　 流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae，Hi)是一種條件致病菌，常寄殖在上呼吸道的鼻咽部和口咽部，在已有纖毛粘膜免疫系統(tǒng)損傷基礎(chǔ)疾病的患者常常引起下呼吸道感染。慢性支氣管炎急性加重期經(jīng)?？梢苑蛛x到流感嗜血桿菌。過(guò)去的觀點(diǎn)認(rèn)為流感嗜血桿菌是胞外菌，但越來(lái)越多的證據(jù)顯示流感嗜血桿菌亦可在胞內(nèi)定植，侵入上皮細(xì)胞層的流感嗜血桿菌可逃避抗體和抗生素的打擊。有研究通過(guò)掃描電鏡(SEM)、投射電鏡(TEM

2、)證實(shí)了流感嗜血桿菌可粘附在非纖毛氣道粘膜上皮細(xì)胞表面，引起細(xì)胞骨架重排和微絨毛包繞細(xì)菌等方式導(dǎo)致細(xì)胞吞噬細(xì)菌。目前研究不同抗生素對(duì)支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)流感嗜血桿菌的清除情況國(guó)內(nèi)尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 目的：
　　 通過(guò)分離培養(yǎng)臨床流感嗜血桿菌菌株，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，了解我院流感嗜血桿菌耐藥情況，并將流感嗜血桿菌作用于無(wú)血清培養(yǎng)3-6代人支氣管氣道上皮細(xì)胞，觀察胞內(nèi)菌株的數(shù)量變化；將臨床常見(jiàn)3種抗生素作用于上皮細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌，觀

3、察胞內(nèi)菌的數(shù)量變化，為臨床抗生素合理選擇和應(yīng)用提供理論指導(dǎo)和依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、采集2009年9月至2009年12月我院呼吸科和兒科的住院、門(mén)診呼吸道感染患者的咽拭子、痰標(biāo)本，床邊接種到巧克力培養(yǎng)基中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱孵育24h。共從兒科門(mén)診不同呼吸道感染患者口咽部拭子分離流感嗜血桿菌9株，呼吸科病房及門(mén)診COPD患者痰培養(yǎng)分離流感嗜血桿菌11株。
　　 2采用Etest紙條對(duì)分離株行體外

4、藥物敏感性測(cè)定，藥物包括氨芐西林、頭孢呋辛、氧氟沙星、莫西沙星、厄他培南、頭孢克羅、頭孢噻肟、阿奇霉素、頭孢丙烯、頭孢地尼、頭孢吡肟。
　　 3、所有分離株進(jìn)行β-內(nèi)酰胺酶檢測(cè)。
　　 4、用收集的9株流感嗜血桿菌感染人支氣管上皮細(xì)胞(購(gòu)自于中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院中心實(shí)驗(yàn)室)4h。細(xì)胞外的流感嗜血桿菌用慶大霉素清除。設(shè)四組感染了Hi(取9株菌株中的3株菌株)的人支氣管上皮細(xì)胞組，分別加入莫西沙星、阿奇霉素、氨芐西林1mg/L

5、作用4h、8h，以未添加任何抗生素組作為陰性對(duì)照。另外設(shè)四組感染了Hi的人支氣管上皮細(xì)胞組，分別加入莫西沙星、阿奇霉素、氨芐西林10mg/L作用4h、8h，以未添加任何抗生素組作為陰性對(duì)照。支氣管上皮細(xì)胞破膜后采用10倍系列稀釋法計(jì)算細(xì)菌數(shù)，以十位數(shù)菌落為判斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1、通過(guò)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)株和臨床分離的20株流感嗜血桿菌Etest法藥敏試驗(yàn)，結(jié)果流感嗜血桿菌對(duì)頭孢呋辛、氧氟沙星、莫西沙星、厄他培南、頭孢克羅、

6、頭孢噻肟、阿奇霉素、頭孢丙烯、頭孢地尼、頭孢吡肟100％敏感，對(duì)氨芐西林敏感率為90％。
　　 2、β-內(nèi)酰胺酶的陽(yáng)性率約為10％。
　　 3、取用的9株細(xì)菌可侵入到人支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)，侵入率均＞0.01％，菌株侵入率＞0.1％的占所取用菌株的55.6％(共計(jì)5株)，菌株侵入率＞1％的占所取用菌株的22.2％(共計(jì)2株)，其中最強(qiáng)的第四株細(xì)菌可在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)2×105cfu/孔。
　　 4、和空白對(duì)照組相比，8小時(shí)

7、后氨芐西林組(10mg/L)對(duì)細(xì)胞內(nèi)的Hi數(shù)量沒(méi)有影響(P=0.685)。不同濃度阿奇霉素(1mg/L和10mg/L)在4小時(shí)、8小時(shí)后均可引起細(xì)胞內(nèi)Hi明顯減少。阿奇霉素顯示可以延遲對(duì)胞內(nèi)Hi作用。濃度為10mg/L的莫西沙星在4小時(shí)可清除98.5％-98.8％的細(xì)胞內(nèi)Hi(P=0.000)，濃度為1mg/L的莫西沙星在4小時(shí)可消除80％-88.7％的細(xì)胞內(nèi)Hi(P=0.006)，8小時(shí)可消除99.1％-99.2％的細(xì)胞內(nèi)Hi(P=0

8、.000)。
　　 結(jié)論：
　　 1、臨床分離的流感嗜血桿菌菌株對(duì)臨床常見(jiàn)抗生素敏感。
　　 2、流感嗜血桿菌分離株產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶率不高，為10％。
　　 3、流感嗜血桿菌可在支氣管上皮細(xì)胞胞內(nèi)增植。
　　 4、氨芐西林對(duì)胞內(nèi)流感嗜血桿菌無(wú)作用。阿奇霉素清除胞內(nèi)流感嗜血桿菌能力差于莫西沙星，但它也可以使胞內(nèi)菌明顯減少。莫西沙星是針對(duì)胞內(nèi)流感嗜血桿菌的較為有效的抗生素。本實(shí)驗(yàn)提示莫西沙星為最強(qiáng)的清除