HDAC6在炭黑顆粒致人支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用.pdf

1、目的:探討組蛋白去乙酰化酶6在炭黑顆粒誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用。
　　方法:體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞(16HBE)，以細(xì)胞空白為對(duì)照組，分別用12.5、25、50、100μg/ml濃度的炭黑顆粒(Printex90)染毒細(xì)胞12、24、36、48h后，采用Cell Counting Kit-8法(CCK-8)檢測(cè)細(xì)胞活力確定染毒時(shí)間。采用HDAC6siRNA預(yù)處理16HBE細(xì)胞，將實(shí)驗(yàn)分為六組，細(xì)胞空白對(duì)照組、25μg/

2、ml炭黑顆粒組、50μg/ml炭黑顆粒組、HDAC6siRNA干擾空白組、25μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組、50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組，染毒24h后，收集染毒細(xì)胞和上清液，采用RT-PCR檢測(cè)HDAC6基因mRNA相對(duì)表達(dá)水平，WB檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)HDAC6、纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白IFT88和自噬體蛋白LC3-Ⅱ等蛋白表達(dá)水平，ELISA檢測(cè)細(xì)胞上清液中IL-8、IL-1β、TNF-α、IL-6、TGF-β1

3、和IL-17A等炎性細(xì)胞因子的釋放量。
　　結(jié)果:(1)在染毒各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，炭黑顆粒染毒16HBE細(xì)胞后可導(dǎo)致細(xì)胞活力明顯下降，隨著炭黑顆粒濃度的增加，細(xì)胞存活率明顯下降，呈現(xiàn)較明顯的劑量反應(yīng)關(guān)系，且隨著染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，16HBE細(xì)胞活力也逐漸下降。炭黑顆粒作用于16HBE細(xì)胞24h后細(xì)胞內(nèi)HDAC6mRNA相對(duì)表達(dá)水平先升高后下降，當(dāng)炭黑顆粒濃度為12.5μg/ml時(shí)，細(xì)胞內(nèi)HDAC6mRNA表達(dá)水平升高，但隨著炭黑顆粒濃度的升高

4、，細(xì)胞內(nèi)HDAC6mRNA的表達(dá)水平逐漸下降，當(dāng)炭黑顆粒濃度達(dá)到100μg/ml時(shí)，HDAC6mRNA表達(dá)顯著低于細(xì)胞空白對(duì)照組(P＜0.05）。但染毒后細(xì)胞內(nèi)HDAC6蛋白的表達(dá)水平隨著炭黑濃度的升高逐漸增加，當(dāng)炭黑濃度為25μg/ml時(shí)，HDAC6蛋白表達(dá)水平達(dá)到最高，當(dāng)炭黑顆粒濃度為100μg/ml時(shí)HDAC6蛋白表達(dá)降低至正常水平。炭黑顆粒染毒的細(xì)胞內(nèi)自噬體蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)水平增加，而IFT88蛋白水平呈逐漸下降趨勢(shì)，當(dāng)炭黑

5、顆粒濃度在100μg/ml時(shí)，LC3-Ⅱ蛋白表達(dá)水平顯著高于細(xì)胞空白對(duì)照組(P＜0.05）;當(dāng)炭黑顆粒濃度≧50μg/ml時(shí)，IFT88蛋白表達(dá)水平顯著低于細(xì)胞空白對(duì)照組(P＜005)。細(xì)胞上清液中炎性細(xì)胞因子IL-8、IL-1β、TGF-β1和IL-17A的表達(dá)水平隨著炭黑顆粒濃度的升高呈上升趨勢(shì)，當(dāng)炭黑顆粒濃度≧25μg/ml時(shí)，IL-8的表達(dá)水平顯著高于細(xì)胞空白對(duì)照組(p＜0.05），當(dāng)炭黑顆粒濃度≧50μg/ml時(shí)，TGF-β1

6、的表達(dá)水平顯著高于細(xì)胞空白對(duì)照組(p＜0.05)，當(dāng)炭黑顆粒濃度為100μg/ml時(shí)，IL-1β和IL-17A的表達(dá)水平高于細(xì)胞空白對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05）;但TNF-α和IL-6的表達(dá)水平略高于細(xì)胞空白對(duì)照組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞005)。
　　(2)與正常染毒細(xì)胞組比較，炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組HDAC6mRNA表達(dá)水平顯著下降(p＜0.05）。當(dāng)炭黑顆粒濃度為50μg/ml時(shí)，HDAC6siR

7、NA干擾的細(xì)胞內(nèi)IFT88蛋白水平顯著高于HDAC6siRNA干擾細(xì)胞空白組(P＜0.05）;但自噬體蛋白LC3-Ⅱ表達(dá)水平略下降。50μg/ml炭黑顆粒+HDAC6siRNA干擾組細(xì)胞釋放IL-8、IL-6和TGF-β1水平顯著升高，TNF-α顯著下降，與HDAC6siRNA干擾的細(xì)胞空白組相比，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:炭黑顆?？蓪?dǎo)致16HBE細(xì)胞活力明顯下降，細(xì)胞內(nèi)HDAC6蛋白表達(dá)水平和纖毛自噬的水