MAPK信號通路在二氧化硅誘導的人支氣管上皮細胞上皮-間質轉型中的作用機制研究.pdf

1、目的：研究二氧化硅(Si02)體外誘導的人支氣管上皮細胞(HBE)上皮一間質轉型(EMT)及MAPK信號通路在此過程中的作用機制。
　　 方法：(1)倒置顯微鏡觀察Si02處理HBE細胞后的形態(tài)學改變；(2)用不同濃度矽塵(0μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，300μg/ml)處理HBE細胞72h后WestemBlot檢測上皮細胞標志物E-鈣粘蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌動蛋白(α-S

2、MA)、間質細胞標志物波形蛋白(Vimentin)蛋白表達水平的改變；(3)采用MAPK活性檢測試劑盒檢測Si02處理HBE細胞不同時間點(Oh，0.5h，lh，2h，4h，8h)ERK和p38活性改變；(4)WesternBlot檢測經不同濃度ERK、p38特異性抑制劑U0126和SB203580（10μM，20μM，30μM）預處理lh后，矽塵誘導的HBE細胞E-cadhefin、α-SMA和Vimentin蛋白表達的改變；(5)免

3、疫印跡檢測30μMM的U0126和SB203580兩者共同干預HBE細胞后E-cadhefin、Vimentin和α-SMA蛋白表達的改變。
　　 結果：(1)Si02處理HBE細胞后，Si02濃度在200μg/ml細胞形態(tài)變化最明顯，細胞失去了鋪路石樣改變，呈梭形、紡錘形；(2)不同濃度Si02(0，50，100，200，300μg/ml)處理HBE細胞72h后，隨著Si02濃度的升高，E-cad表達逐漸降低，α-SMA和Vi

4、mentin表達逐漸升高，在Si02濃度為200μg/ml時E-cad蛋白表達水平（1.42±0.10）明顯低于對照組的表達水平(3.74+0.95)(P<0.05)，E-cad在SiO2濃度為300μg/ml時最低，并且在100、200、300μg/ml組均有統(tǒng)計學差異(P<0.05)；而α-SMA在Si02濃度為200μg/ml時達到高峰，為對照組的(5.09±1.98)倍，在200～300μg/ml時α-SMA表達略有下降，但仍高

5、于對照組(P<0.05)；Vimentin在Si02濃度為300μg/ml時最高，為對照組的(7.30±3.02)倍，在200、300μg/ml組均有統(tǒng)計學差異（P<0.05）；(3)Si02作用于HBE細胞能誘導ERK和p38激酶活化，于30min開始出現(xiàn)ERK和p38磷酸化水平增高，分別于60min和30min之后逐漸減弱；(4)干預實驗，免疫印跡結果顯示，U0126(20，30μpM)干預組，E-cadherin蛋白表達分別為Si

6、02(200μg/ml)處理組的（2.52±0.87）倍和（3.17±0.88）倍(P<0.05)，30μM的U0126預處理后，α-SMA和Vimentin表達減少，抑制率分別為40.43％和60.33％(P<0.05)；SB203580(30μM)干預組，E-cadherin表達為SiO2(200μg/ml)處理組的（1.77±0.26）倍(P<0.05)，α-SMA和Vimentin表達減少，抑制率分別為34.67％和55.44％