Ghrelin抑制結腸上皮細胞凋亡及其信號通路.pdf

1、目的
　　 研究ghrelin是否能夠抑制結腸上皮細胞凋亡,觀察一些凋亡相關蛋白表達水平的變化,并進一步探討ghrelin是否通過PI3K/Akt和ERK1/2信號通路抑制結腸上皮細胞凋亡。
　　 方法
　　 1.通過RT-PCR檢測HT-29結腸癌細胞株上是否有GHS-R1a的表達。
　　 2.將細胞分為對照組和處理組,處理組細胞由5-Fu(80μM)單獨或與ghrelin(10-9M-10-6M)共同

2、處理24h-48h。
　　 3.通過MTT法對各組細胞進行生長活性的檢測,計算細胞生存率。
　　 4.通過DAPI染色后在熒光顯微鏡下觀察各組細胞核的形態(tài)。
　　 5.通過Annexin V/PI雙染色后行流式細胞術,測定并比較各組細胞的凋亡率。
　　 6.通過Western-blot觀察凋亡相關蛋白caspase3、bcl-2、bax及信號傳導蛋白Akt、P-Akt、ERK1/1、P-ERK1/2的表達

3、水平在各組中的變化。
　　 結果
　　 1.RT-PCR檢測到HT-29細胞上有GHS-R1a的表達。
　　 2.MTT法顯示ghrelin呈劑量依賴性地降低了5-Fu引起的HT-29細胞生長抑制,提高了細胞生存率(P＜0.05)。
　　 3.DAPI染色后熒光顯微鏡下觀察細胞核的形態(tài)發(fā)現(xiàn)5-Fu單獨處理的細胞出現(xiàn)染色質邊集、核皺縮、核破裂等典型的凋亡改變,而ghrelin減少了這種改變。
　　

4、4.Annexin V-FITC/PI雙染色后行流式細胞術,檢測到ghrelin呈劑量依賴性地降低了5-Fu引起的細胞凋亡率(P＜0.05)。
　　 5.共同處理組與5-Fu單獨處理組相比:caspase3活性降低,bcl-2表達增加而bax表達下降,Akt和ERK被激活,P-Akt和P-ERK表達增加。
　　 結論
　　 Ghrelin能夠抑制結腸上皮細胞凋亡,并可能通過PI3K/Akt及ERK1/2信號通路介