2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  探究過表達(dá)BrafV600E的結(jié)腸上皮細(xì)胞中,雌激素對(duì)增殖、凋亡的影響及其機(jī)制。
  方法:
  首先將 BrafV600E和空載體的兩種質(zhì)粒包裝成慢病毒,然后感染結(jié)腸黏膜上皮細(xì)胞NCM460。經(jīng)嘌呤霉素篩選出陽性的過表達(dá)細(xì)胞(NCM460-BrafV600E和NCM460-Vector),再利用western blot方法檢測(cè)BrafV600E及其下游的p-mek蛋白表達(dá)情況以確保建立了NCM460-Br

2、afV600E和 NCM460-Vector兩種穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株。在有或無雌激素存在的條件下,通過生長(zhǎng)曲線和 MTT方法檢測(cè)兩種細(xì)胞的增殖情況;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)雌激素對(duì)兩種細(xì)胞凋亡的影響;轉(zhuǎn)染si PPARγ至NCM460-BrafV600E細(xì)胞,采用qPCR及western blot檢測(cè)PPARγ的轉(zhuǎn)錄及翻譯水平的沉默的影響,進(jìn)而通過流式細(xì)胞儀和western blot檢測(cè)NCM460-BrafV600E細(xì)胞的凋亡數(shù)量及凋亡相關(guān)蛋白的表

3、達(dá)情況。
  結(jié)果:
  雌激素可以抑制 NCM460-BrafV600E細(xì)胞的增殖,通過增加 PPARγ的表達(dá),進(jìn)而增加NCM460-BrafV600E細(xì)胞的凋亡數(shù)量(P<0.05)。轉(zhuǎn)染si PPARγ之后,NCM460-BrafV600E細(xì)胞凋亡的數(shù)量明顯減少(P<0.05),且促凋亡蛋白(Bax,Bak,cleaved-caspase3)表達(dá)降低,同時(shí)抗凋亡蛋白(Bcl-2)表達(dá)增高。
  結(jié)論:
  B

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